活化TLR2誘導(dǎo)單核細(xì)胞性白血病THP-1細(xì)胞的凋亡和分化.pdf

1、目的:白血病是造血干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化引起的疾病，其特點(diǎn)之一是細(xì)胞分化被阻滯在幼稚階段，不能產(chǎn)生成熟的功能白細(xì)胞，從而導(dǎo)致貧血、出血、感染等一系列臨床表現(xiàn)。因而，誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化和促進(jìn)其凋亡成為白血病治療的新方向。Toll樣受體在機(jī)體抗微生物感染中發(fā)揮著重要作用，其功能為識別微生物的組成分子，誘導(dǎo)抗微生物非特異性的天然免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)。樹突狀細(xì)胞表面表達(dá)的Toll樣受體識別微生物組成分子后，促使其分化成熟同時啟動抗原特異性的獲得性免疫應(yīng)答

2、。TLR2能識別多種微生物細(xì)胞的組成分子，如細(xì)菌脂蛋白、脂磷壁酸、脂多糖(LPS)。細(xì)菌脂蛋白通過活化TLR2能誘導(dǎo)THP-1的凋亡，本實(shí)驗(yàn)的目的是探討TLR2的另一配體PGN(肽聚葡糖)誘導(dǎo)單核細(xì)胞性白血病THP-1凋亡與分化的可能性，為臨床治療白血病提供新的思路。 方法: (1)RT-PCR檢測基因的表達(dá)。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測蛋白質(zhì)的表達(dá)。(3)ELISA檢測蛋白質(zhì)的分泌情況。(4)PI-Annexin V染色檢測凋亡水平。

3、(5)抗體中和實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞因子與THP-1凋亡的相關(guān)性。(6)Western Blotting檢測細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)分子的活化。(7)細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測PGN對細(xì)胞粘附的影響。 結(jié)果:RT-PCR分析顯示THP-1細(xì)胞表達(dá)除TLR3以外所有的TLRs，流式細(xì)胞術(shù)檢測到THP-1細(xì)胞表面表達(dá)CD14、TLR2、TLR4蛋白，TLR2配體PGN能上調(diào)CD14、TLR2的表達(dá)。同時PGN能誘導(dǎo) THP-1 細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子 IL-1α、IL

4、-8、TNFα的上調(diào)，并能活化TLR2傳導(dǎo)通路中的P38、ERK以及 NF-κB，說明 THP-1表達(dá)功能性的TLR2受體。PI-Annexin V 染色顯示PGN能誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞的凋亡，并呈時間和劑量依賴性關(guān)系。PGN 所誘導(dǎo)的凋亡與自分泌TNFα密切相關(guān)，因?yàn)镻GN能顯著上調(diào)TNFα的表達(dá)，而且TNFα中和抗體能抑制PGN所誘導(dǎo)的凋亡。分析PGN對 THP-1 表達(dá)凋亡抑制蛋白的影響，結(jié)果顯示PGN所誘導(dǎo)的表達(dá)改變與TNFα所誘