gp78和KAI1在胃癌和肝癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的：
　　 肝癌、胃癌都是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤,其發(fā)病率在我國(guó)有逐年上升趨勢(shì)。浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移則是其致死性的重要機(jī)制。腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移涉及眾多癌基因和抑癌基因之間的平衡失調(diào)和相關(guān)轉(zhuǎn)移基因的表達(dá)異常等,其轉(zhuǎn)移過(guò)程包括腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、黏附、新生血管的形成以及對(duì)基質(zhì)的降解等。
　　 泛素-蛋白酶體途徑(ubiquitin proteasome pathway,UPP)是由泛素(ubiquitin,Ub)以及一系列相關(guān)的酶組成,除

2、泛素以外還包括4種酶家族:泛素活化酶(ubiquitin-activating enzyme,E1)、泛素結(jié)合酶(ubiquitin-conjugating enzymes,E2)、泛素-蛋白連接酶(ubiquitin-ligating enzymes,,E3)和蛋白酶體(proteasome),包括20S和26S蛋白酶體,而26S是由20S和19S復(fù)合體共同結(jié)合裝配而成。
　　 KAI1基因定位于人染色體11p11.2,是一段

3、全長(zhǎng)2.4 kb的DNA片段,早先被證明是前列腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因。其編碼一個(gè)分子量為29,610 kDa的蛋白質(zhì)-KAI1蛋白,事實(shí)上,人們研究發(fā)現(xiàn),KAI1蛋白結(jié)構(gòu)與CD82完全相同。KAI1蛋白是TM4SF成員之一,其具有4個(gè)疏水跨膜區(qū)和一個(gè)較大的胞外親水區(qū),在胞外親水區(qū)中則含有3個(gè)潛在的N端糖基化位點(diǎn)。研究表明KAI1通過(guò)影響細(xì)胞.細(xì)胞、細(xì)胞基質(zhì)之間的相互作用,從而影響腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)。大量研究表明,KAI1蛋白參與細(xì)胞與細(xì)胞-

4、細(xì)胞與細(xì)胞-外基質(zhì)間的反應(yīng),并可與腫瘤細(xì)胞表面黏附受體的結(jié)合,通過(guò)封閉黏附受體、阻斷腫瘤細(xì)胞黏附從而抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移并保護(hù)機(jī)體免于內(nèi)源性和外源性物質(zhì)損傷。
　　 Gp78也被稱為腫瘤自分泌運(yùn)動(dòng)因子受體,它是一個(gè)跨膜蛋白。其表達(dá)水平與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。研究表明,gp78是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)環(huán)指結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的泛素蛋白連接酶(E3)。Gp78可特異性地募集MmUBC7,而MmUBC7是一種泛素蛋白連接酶(E2),可通過(guò)指環(huán)的一個(gè)特定區(qū)域

5、參與了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)的降解。更為重要的是,gp78也能介導(dǎo)CD3δ的降解,而CD35則是ER相關(guān)降解最具特征的底物。相反,當(dāng)gp78缺少緊密的指環(huán)和多重的跨膜區(qū)域時(shí),CD36的穩(wěn)定性大大提高。因此,gp78被認(rèn)為是泛素化、ER降解以及腫瘤轉(zhuǎn)移潛在的樞紐。同時(shí),研究發(fā)現(xiàn)gp78與惡性腫瘤預(yù)后不良有關(guān)。在相關(guān)性研究中,人們發(fā)現(xiàn),泛素連接酶gp78可靶向作用于KAI1,增加KAI1的降解,從而減少KAI1的表達(dá),增加肉瘤細(xì)胞系的轉(zhuǎn)移潛能。

6、　　 事實(shí)上,gp78、KAI1在消化道腫瘤中的系統(tǒng)研究還不多見(jiàn)?；诖?本課題擬通過(guò)檢測(cè)gp78、KAI1在肝癌、胃癌組織中表達(dá)情況并結(jié)合相關(guān)臨床資料,探討gp78、KAI1在消化道腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中意義及相關(guān)性。同時(shí),我們采用小鼠肝癌模型,采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)肝組織中g(shù)p78和KAI1的表達(dá)水平。通過(guò)上述研究我們希望初步探討gp78、KAI1在消化道腫瘤中可能的作用機(jī)制,為其將來(lái)運(yùn)用于臨床診斷、預(yù)后判斷、藥物治療靶點(diǎn)的選擇等

7、提供一定的臨床和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法
　　 1.收集人肝癌、胃癌組織標(biāo)本,采用免疫組化法、Western blot法,檢測(cè)癌組織中g(shù)p78及KAI1表達(dá)情況。
　　 2.建立小鼠肝癌模型,采用免疫組化法、Western blot法檢測(cè)裸鼠癌組織中g(shù)p78及KAI1表達(dá)變化。
　　 3.所有計(jì)量資料以x-±s,采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。兩組間比較采用t檢驗(yàn)或X2檢驗(yàn)。采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)比較

8、癌與正常組織之間gp78及KAI1表達(dá)的差異,Spearman相關(guān)性分析檢驗(yàn)分析gp78和KAI1之間的相關(guān)性,以p＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果
　　 1.人肝癌、胃癌組織中,gp78蛋白表達(dá)明顯上調(diào),KAI1表達(dá)明顯下調(diào)。
　　 2.裸鼠肝癌組織中g(shù)p78蛋白表達(dá)明顯上調(diào),KAI1蛋白表達(dá)明顯下調(diào)。
　　 3.肝癌和胃癌組織中g(shù)p78和KAI1表達(dá)水平呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)