血液灌流前后百草枯濃度的測定及影響預后的因素分析.pdf

1、百草枯(PQ)以其良好的除草效果得到人們的青睞，但隨之帶來的誤服或自殺性口服的極高死亡率給醫(yī)療工作者提出了巨大的挑戰(zhàn)。人們嘗試用各種方法搶救百草枯中毒，但至今仍不理想。臨床上常用的治療措施之一是血液灌流(HP)，HP可以清除血漿中的百草枯，防治中毒急性期的多器官功能衰竭和后期的肺纖維化及呼吸衰竭。中毒嚴重者常需多次灌流，但目前臨床缺少檢測灌流前后百草枯濃度的方法，僅憑經驗決定灌流次數(shù)。本課題建立了血液灌流前后血液中百草枯濃度的檢測方法，

2、同時對影響百草枯中毒預后的因素進行了分析，為臨床監(jiān)測及救治百草枯中毒提供標準和依據(jù)。 第一部分紫外分光光度法測定血液灌流前后百草枯濃度 目的：建立紫外分光光度法測定血液灌流前后百草枯濃度的方法，為臨床有效搶救百草枯中毒提供量化指標。 方法：(1)樣品預處理血清樣品與20％三氯乙酸按照6∶1混勻，以4000r/min離心 10min，取上清液進行紫外測定。(2)檢測波長的選擇配制50μg/ml的百草枯溶液，以蒸餾水

3、為空白對照，進行紫外掃描，百草枯在257nm處有最大吸收，干擾最小，選定257nm為檢測波長。(3)標準曲線繪制配制500μg/ml的百草枯溶液，將其用空白血清逐級稀釋為 50、10、4、2、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05μg/ml 的百草枯溶液，按照方法(1)處理。在257nm下測定吸收度A值，以A值對濃度C進行回歸，得標準曲線方程。(4)回收率試驗：采用加入回收法，按方法(1)處理血清，用血清上清液配制濃度為 2.00、4

4、.00、10.00、50.00μg/ml 的百草枯溶液。以同樣處理的血清上清液作參比，紫外測定，計算平均回收率。(5)精密度試驗：配制0.4、0.8、2.0、4.0μg/ml的百草枯溶液，分別在日內各作5次，4℃冰箱保存，并隔日對每個濃度樣品連續(xù)各做5次，分別求算日內與目間相對標準偏差。(6)樣品含量測定：血清中加入20％三氯乙酸(6∶1)，渦旋混勻1min，以4000r/min離心5min，取上清液上機分析。(7)SOD測定：按照SO

5、D測試盒說明分別測定百草枯中毒患者血清中的SOD活力。 結論：本實驗建立的紫外分光光度法測定灌流前后百草枯血藥濃度，線性范圍寬、靈敏度高、重現(xiàn)性好；同時建立的血樣處理方法可靠，為臨床血液灌流前后百草枯濃度的測定提供了簡單快速的檢測方法。但檢測限不能滿足痕量殘留的檢測。 第二部分利用膠束毛細管電泳在線推掃富集技術檢測人體血液灌流前后百草枯殘留 目的：建立采用膠束毛細管電泳在線推掃富集技術快捷檢測血液中百草枯濃度痕

6、量殘留的方法，為臨床多次血液灌流治療百草枯中毒提供依據(jù)。 方法：(1)電泳條件與操作：未涂層熔硅毛細管，48.5cm×50μm (有效柱長40cm)；運行緩沖液：50mmol/l磷酸鹽-80mmol/LSDS (pH=2.5)；進樣時間 600s；進樣壓力50nabar；運行電壓 22kV；紫外檢測波長 260nm。實驗前，毛細管柱分別用 1.0mol/l NaOH溶液、1.0mol/l HCl溶液、水、背景緩沖溶液(BGS)沖

7、洗 10min，用緩沖溶液平衡 10min。每次進樣前分別用 1.0mol/l NaOH溶液、1.0mol/l HCl溶液、水和BGS各沖洗 5min。(2)樣品預處理：血消中加入10％三氯乙酸(3∶1) 靜置10min，以10000r/min離心5min，取上清液上機分析。(3)線性范圍和檢出限：準確稱取百草枯標樣適最，配成標準溶液系列(35，20，10，5，1，0.4，0.2，0.1，0.05mg/l)。在已建立電泳條件下進行檢測，

8、以峰高對其質量濃度(x，mg/l)作圖，得標準曲線方程。(4)回收率及相對標準偏差：取中毒病人血漿分成6份，其中3份直接按實驗方法處理，取其分析結果平均值作為基樣濃度，另3份準確加入適量百草枯標準品，按實驗方法處理，測定結果作為加標濃度，計算RSD和回收率。(5)樣品含量測定：對河北大學附屬醫(yī)院提供百草枯中毒患者血樣按以上方法(2)處理，進行檢測分析。 結論：本實驗建立的利用膠束毛細管電泳在線富集技術檢測血液中百草枯濃度痕量殘

9、留的方法，線性范圍寬、檢測限低，靈敏度高、重現(xiàn)性好；樣品預處理方法簡單、成本低、不會造成環(huán)境污染，適合于臨床血液中百草枯濃度痕量殘留的檢測。 第三部分影響百草枯中毒預后的因素分析 百草枯中毒患者預后受多種因素影響，目前尚無特效治療方法。本實驗對河北大學附屬醫(yī)院救治的百草枯中毒患者的預后進行回顧性分析，為臨床治療提供依據(jù)。 實驗結果表明百草枯中毒患者的預后與諸多因素有關，現(xiàn)歸納如下： 1.服毒劑量與就診時間

10、本研究資料顯示服毒量越大，中毒癥狀越重，病死率越高。對口服中毒而言，就診越早，洗胃越早越徹底，毒物吸收越少(中毒劑量也越小)，預后就越好。 2.首次灌流時間血液灌流的早晚與患者的存活與否有很大關系。灌流越早，病死率越低。 3.并發(fā)癥百草枯可以在多種器官及組織內蓄積，引起相應的損傷，甚至引起多器官功能衰竭。本組病例肺、腎、肝、心及消化道的并發(fā)癥均有發(fā)生，以肺、腎為主。死亡組各種并發(fā)癥發(fā)生頻率均高于存活組，且受累器官數(shù)也較多