日本血吸蟲感染小鼠體內(nèi)IL-17、IL-23的動(dòng)態(tài)變化研究.pdf

1、在人類的寄生蟲病中，血吸蟲病是嚴(yán)重影響社會(huì)經(jīng)濟(jì)和公共健康的一種全球性疾病，其危害性僅次于瘧疾。血吸蟲病在約76個(gè)國家或地區(qū)流行，主要分布在亞洲、非洲與拉丁美洲。對(duì)人體危害較大的血吸蟲有3 種，即日本血吸蟲、埃及血吸蟲、曼氏血吸蟲。其中，在我國流行的是日本血吸蟲，其感染人數(shù)超過76 萬，尤其在農(nóng)村和城郊地區(qū)，由于人群衛(wèi)生知識(shí)缺乏及基本衛(wèi)生設(shè)施達(dá)不到衛(wèi)生要求，而使該地區(qū)人群處于高感染風(fēng)險(xiǎn)中。
　　 疫苗是控制與根除血吸蟲病的重要手段

2、之一。血吸蟲病的疫苗研究已逾半個(gè)世紀(jì)，目前世界上公認(rèn)為有發(fā)展前途的疫苗候選抗原有6 種，即血吸蟲97kD的副肌球蛋白、谷胱苷肽S 轉(zhuǎn)移酶、Sm37 甘油磷酸脫氫酶、Sm14 脂肪酸結(jié)合蛋白、磷酸丙糖異構(gòu)酶、照射疫苗，但這些疫苗效果不是很理想，離實(shí)際應(yīng)用尚有一定的距離，因此還需進(jìn)一步研究血吸蟲與宿主的相互關(guān)系，研究其免疫效應(yīng)機(jī)制。眾所周知，有效的免疫均會(huì)產(chǎn)生抗原特異性的CD4+T細(xì)胞反應(yīng)，其在宿主防御方面發(fā)揮重要作用。
　　 最近

3、研究發(fā)現(xiàn)了一種新的CD4+T細(xì)胞亞群—Th17，其命名同Th1與Th2 一樣，是一種功能性的分類方法，主要是基于其分泌細(xì)胞因子的不同而命名，分化成熟的Thl7 可以分泌 IL-17A，IL-17F，IL-21，IL-22等多種細(xì)胞因子，其中 IL-17A在宿主防御與自身免疫性疾病中具有重要的調(diào)節(jié)作用。研究還發(fā)現(xiàn)，孤兒核受體 (Orphannuclear receptor，RORγt)是控制 Thl7細(xì)胞分化的特征性轉(zhuǎn)錄因子。在初始CD4

4、+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞的分化中，TGF-β與IL-6 首先啟動(dòng)該過程，隨后產(chǎn)生的Th17細(xì)胞自分泌產(chǎn)生IL-21 擴(kuò)大分化規(guī)模，進(jìn)一步活化STAT3，誘導(dǎo)RORγt表達(dá)；而IL-23是維持Th17 存活的重要因子，缺少IL-23 不影響Th17的產(chǎn)生，但Th17 不能擴(kuò)增和存活。Th17是感染性炎癥必需的效應(yīng)細(xì)胞，研究發(fā)現(xiàn)，多種微生物早期均可誘導(dǎo)表達(dá)IL-17，IL-17與其受體結(jié)合后即可誘導(dǎo)這些受體細(xì)胞（如粒細(xì)胞、上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞

5、）表達(dá)趨化因子與細(xì)胞因子，從而誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的產(chǎn)生、活化并將其招募至感染部位，參與機(jī)體的防御作用。除此外，IL-17的產(chǎn)生還能誘導(dǎo)Th1和TDTH的分化，誘導(dǎo)Th1 型炎癥反應(yīng)。IL-23/IL-17細(xì)胞因子軸越來越成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)問題，基于以上方面的研究，我們認(rèn)為L-23/IL-17細(xì)胞因子軸與日本血吸蟲感染也存在某些方面的聯(lián)系。本實(shí)驗(yàn)擬通過檢測(cè)日本血吸蟲自然感染小鼠模型中IL-17和IL-23的動(dòng)態(tài)表達(dá)來探討L-23/IL-17細(xì)

6、胞因子軸在日本血吸蟲病發(fā)病中的可能作用。
　　 BALB/c 鼠經(jīng)皮感染25條日本血吸蟲尾蚴，在感染后不同時(shí)間點(diǎn)（1、2、4、6、8、10周）剖殺，無菌取脾，分離脾臟組織及脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液，并經(jīng)心臟灌注收集成蟲。用雙抗體夾心ELISA和RT-PCR檢測(cè)正常對(duì)照組（0周處理組）與感染組中IL-17A與IL-23p19在蛋白水平與mRNA 水平的表達(dá)。
　　 ELISA 結(jié)果顯示，血吸蟲感染后，脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-17A

7、 蛋白分泌水平明顯升高，且在感染后的第1周檢測(cè)到急劇升高的IL-17A，此后逐漸下降，至感染后第4周恢復(fù)至正常水平，第8周時(shí)其表達(dá)水平低于正常值；感染后小鼠體內(nèi)IL-23p19的表達(dá)水平也逐步升高，并于感染后第2周到達(dá)高峰，感染后第4周開始逐漸下降，到第8周末IL-23p19的表達(dá)低于正常值。
　　 RT-PCR顯示，正常對(duì)照組與感染后6個(gè)時(shí)間點(diǎn)剖殺的小鼠體內(nèi)均檢測(cè)到IL-17A和IL-23p19 mRNA的表達(dá)，且感染與正常對(duì)

8、照組相比，兩種細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平均有一定程度的上升。感染1周后IL-17A mRNA的表達(dá)水平急劇升高，其結(jié)果與蛋白的表達(dá)是一致的。且研究中我們還發(fā)現(xiàn)，在日本血吸蟲自然感染小鼠模型中IL-17A和IL-23p19 mRNA的變化趨勢(shì)中還存在著正相關(guān)（P<0.01）。
　　 本研究通過對(duì)日本血吸蟲自然感染模型體內(nèi)IL-17A與IL-23p19的動(dòng)態(tài)變化的觀察，發(fā)現(xiàn)：IL-23p19、IL-17A在血吸蟲感染小鼠體內(nèi)協(xié)同表達(dá)，