雞傳染性支氣管炎病毒N和S1基因的克隆表達(dá)及運(yùn)送N基因真核質(zhì)粒減毒沙門氏菌在雞體內(nèi)的免疫原性.pdf

1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文雞傳染性支氣管炎病毒N和S1基因的克隆表達(dá)及運(yùn)送N基因真核質(zhì)粒減毒沙門氏菌在雞體內(nèi)的免疫原性姓名：田華榮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：焦新安20070501l刊華榮：雞傳染性支氣管炎癇毒N和sl基圳的克隆及表達(dá)雞傳染性支氣管炎病毒N和Sl基因的克隆表達(dá)及運(yùn)送N基因真核質(zhì)粒減毒沙門氏菌在雞體內(nèi)的免疫原性研究生：田華榮導(dǎo)師：焦新安教授中文摘要雞傳染性支氣管炎病毒(Infectiousbronchitisvi

2、rus，IBV)，為冠狀病毒屬一員，引起雞的一種急性、高度接觸性傳染病。減毒茁常用于預(yù)防該病，但效果不理想且存在毒力返強(qiáng)的危險(xiǎn)。為此，IB已成為養(yǎng)禽業(yè)最難控制的疫病之一。目前現(xiàn)有的IB基因工程疫苗雖可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生一定的免疫保護(hù)效應(yīng)，但與傳統(tǒng)免疫相比，還存在一定的差距。增強(qiáng)IBVDNA疫苗的免疫效果對(duì)于預(yù)防IB的發(fā)生已顯得尤為重要。為此，本研究擴(kuò)增出IBVN基因和S1基因，對(duì)其序列進(jìn)行了分析。在此基礎(chǔ)上分別構(gòu)建了N基因的原核表達(dá)質(zhì)粒及真核

3、表達(dá)質(zhì)粒。誘導(dǎo)后重組菌的菌體蛋白與IBV陽性血清反應(yīng)后，具有一定的抗原性。同時(shí)用減毒沙門氏菌作為運(yùn)送真核表達(dá)質(zhì)粒的載體，以商品雞為動(dòng)物模型，探討其免疫特性。1雞傳染性支氣管炎病毒N基因和s1基因的克隆、序列分析及原核表達(dá)提取IBVC9001分離株RNA作為模板，根據(jù)GenBank登陸的相應(yīng)S1基因和N基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，其中，用于擴(kuò)增Sl基因的下游引物人為加入終止密碼子。RTPCR擴(kuò)增后得到全長(zhǎng)的N基因和S1基因。序列測(cè)定結(jié)果顯示，

4、所克隆的IBVC9001株N基因ORF全長(zhǎng)為1230Do，編碼409個(gè)氨基酸：同源性比較結(jié)果表明，其與GenBank中有代表性的參考毒株N基因核苷酸和氨基酸序列有較高的同源性，在855％～998％之間。其中與Guangdong株、H52株、saibl4株和saibwj株氨基酸序列同源性高達(dá)993％一998％，尤其以H52株同源性最高。所克隆的s1基因ORF全長(zhǎng)1659bp，編碼552個(gè)氨基酸；同源性比較結(jié)果表明：與GenBank中有代表