嚴(yán)重少精子癥患者血清相關(guān)激素測(cè)定與精子超微形態(tài)及Y染色體微缺失檢測(cè)研究.pdf

1、研究背景：據(jù)世界衛(wèi)生組織的研究顯示，人類的生殖能力在近半個(gè)世紀(jì)的時(shí)間內(nèi)呈持續(xù)下降趨勢(shì)，特別是男性的生殖能力，據(jù)統(tǒng)計(jì)精子的數(shù)量和質(zhì)量平均值從五十年前的每毫升一億一千萬到現(xiàn)在的二千六百萬。在我國(guó)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不孕不育患者中有一半是男性因素造成的。單精子胞漿內(nèi)注射技術(shù)(intracytoplasmicsperm injection，ICSI)的成功使男性少精子癥、無精子癥患者看到了希望，通過治療能夠成為生物學(xué)父親。那么造成男性不育的原因如何，

2、外周血的激素水平哪項(xiàng)更能夠準(zhǔn)確反應(yīng)睪丸的生精功能，精子在形態(tài)學(xué)方面有何改變以及男性不育的遺傳學(xué)問題等等已成為當(dāng)今輔助生殖領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題。 目的： 1．研究嚴(yán)重少精子癥患者外周血清相關(guān)激素：睪酮(testosterone，T)、游離睪酮(free testosterone，F(xiàn)T)、性激素結(jié)合球蛋白 (Sex homone-bindingglobulin，SHBG)、血清抑制素B(inhibin B，IHN-B)水平與睪丸生

3、精功能間的關(guān)系。 2．運(yùn)用掃描電子顯微鏡(scaiming electron microscope，SEM)觀察測(cè)定嚴(yán)重少精子癥患者精子表面結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，檢測(cè)精子畸形指數(shù) (sperm defomity index，SDI)，與精子常規(guī)染色 (Diff-Ouik法) 光學(xué)顯微鏡觀察進(jìn)行對(duì)比研究。 3．進(jìn)行精子DNA提取，Y染色體微缺失(Y cheornosome microdeletion analysis)研究，比較體細(xì)胞

4、Y染色體微缺失與配子Y染色體微缺失發(fā)生率。 方法： 1．嚴(yán)格按照 WHO 標(biāo)準(zhǔn)篩選分組，嚴(yán)重少精子癥患者為實(shí)驗(yàn)組 (重復(fù)精予常規(guī)計(jì)算機(jī)分析檢測(cè)精子密度低于5×10<'6>/ml，經(jīng) 2 次以上檢查并離心沉淀末見精子者除外)。對(duì)照組為已生育男性。于晨起間隔2小時(shí)抽取外周血兩次，離心分離血清，將兩次血清混勻后取適量混合，運(yùn)用ELSA法測(cè)定外周血T、FT、SHBG、IHN-B進(jìn)行檢測(cè)。 2.采取精液后運(yùn)用梯度離心分離精

5、子，運(yùn)用錫箔紙作為精子SEM載體，按SEM制樣程序制樣，觀察精子表面超微形態(tài)特點(diǎn)及缺陷；運(yùn)用 Diff-Quik 法涂片常規(guī)染色精子，在光鏡下進(jìn)行精子頭部缺陷、頸部缺陷、尾部缺陷記數(shù)觀察；比較兩種精子形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法。 3.提取精子DNA，運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chaillreaction，PCR) 特異地?cái)U(kuò)增Y染色體上的目標(biāo)區(qū)域，進(jìn)行精子Y染色體微缺失檢測(cè)和外周血Y染色體微缺失率檢測(cè)。 4.結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)分析。 結(jié)果： 1.嚴(yán)重少精子癥患者外周血血清IHN-B 較對(duì)照組明顯降，差異有顯著性。血清T、FT、SHBG 與對(duì)照組相比差異無顯著性。 2.嚴(yán)重少精子癥患者的精子存在超微形態(tài)異常，SEM 觀察發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重少精子癥患者SDI與對(duì)照組比較明顯增高(1.64±0.55和0.86±0.23，P<0.05)。 3.嚴(yán)重少精子患者精子Y染色體微缺失檢測(cè)發(fā)現(xiàn)存在無精子癥因子(azoospermia factor, A

7、ZF) C區(qū) (AZFc)缺失，其發(fā)生率為15％，較外周血AZFc檢測(cè)發(fā)生率6.7％明顯增高，差異具有顯著性差異。未發(fā)現(xiàn)AZFa、AZFb等其它缺失。 結(jié)論： 1.嚴(yán)重少精子癥患者的血清抑制素B檢測(cè)較T、FT、SHBG 等檢測(cè)指標(biāo)能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)睪丸的生精功能。 2.嚴(yán)重少精子癥之精子存在表面超微結(jié)構(gòu)異常，其SDI明顯高于對(duì)照組，SEM觀察精子較光學(xué)顯微鏡普通染色技術(shù)更能夠發(fā)現(xiàn)精子的頭頸部缺陷。 3.嚴(yán)重少精子

8、癥患者精子Y染色體微缺失檢測(cè)發(fā)現(xiàn)AZFc缺失陽性率明顯高于外周血檢測(cè)結(jié)果。 討論： 1．男性不育呈不斷上升趨勢(shì)，使得我們不得不正視這個(gè)問題，多年以來學(xué)術(shù)界一直尋求更好、更準(zhǔn)確的研究指標(biāo)來反應(yīng)睪丸的生精功能，水研究選取了目前較為關(guān)注的幾個(gè)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)比較，發(fā)現(xiàn) IHN-B 水平的高低能夠更為準(zhǔn)確的反應(yīng)精子的生成情況。 2．在精子掃描電子顯微鏡標(biāo)本制樣觀測(cè)，具有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，能夠更為直觀發(fā)現(xiàn)精子的缺陷。通過對(duì)于一些反