Curcumin通過抑制GSK-3β的活性激活Wnt-β-catenin通路防治AD的體外研究.pdf

1、目的：在AD發(fā)生和發(fā)展的過程中，Wnt/β-catenin信號傳導(dǎo)通路發(fā)揮了重要的作用。本課題旨在通過體外研究GSK-3β的選擇性抑制劑--Curcumin對與Wnt/β-catenin通路密切相關(guān)的因子GSK-3β、β-catenin和CyclinD1表達的影響，以及對Aβ產(chǎn)生的影響，探討其發(fā)揮作用的機制，為Curcumin有效的治療AD提供新的理論證據(jù)。 方法：體外培養(yǎng)神經(jīng)系細胞SHSY5Y，以LipofectaminTM2

2、000脂質(zhì)體介導(dǎo)瞬時共轉(zhuǎn)染pBACE1-mychis和pAPPswe兩種質(zhì)粒，Curcumin分濃度梯度（0、1.25、5.0、20.0μmol/L）處理24h，以及5.0μmol/LCurcumin按時間梯度（0、12、24、48h）處理，然后通過RT-PCR檢測GSK-3β、β-catenin和CyclinD1mRNA水平，Western blot檢測GSK-3β、β-catenin和CyclinD1以及磷酸化形式GSK-3β-Se

3、r9蛋白表達情況，免疫熒光方法檢測GSK-3β和β-catenin在細胞內(nèi)的定位和蛋白的表達變化情況，最后ELISA檢測Aβ40/42水平。 結(jié)果：RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示，經(jīng)Curcumin處理后，轉(zhuǎn)染的SHSY5Y細胞內(nèi)GSK-3β mRNA和蛋白表達水平都顯著減弱，呈濃度-時間依賴性（P<0.05）；而GSK-3β的磷酸化形式GSK-3β-Ser9蛋白水平卻明顯增加；β-catenin mRNA和蛋白

4、水平也增加，其轉(zhuǎn)錄因子CyclinD1的mRNA以及蛋白表達水平也顯著增加，呈濃度-時間依賴性（P<0.05）。免疫熒光染色結(jié)果不但證實了GSK-3β、β-catenin在細胞漿內(nèi)量的變化，而且還發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度的增加，β-catenin逐漸向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移。ELISA檢測到的Aβ40、Aβ42表達水平都明顯降低，呈現(xiàn)濃度-時間依賴性，其中以Aβ42降低更明顯（P<0.05）。 結(jié)論：GSK-3β是一個潛在性的AD治療靶點，Cur