嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤microRNAs研究.pdf

1、第一部分，嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤腫瘤組織中miR-483-5p.miR-183、miR-21、miR-210的研究
　　 目的：
　　 良、惡性嗜鉻細(xì)胞瘤/副神經(jīng)節(jié)瘤(PCC/PGL)的鑒別診斷仍是難點(diǎn)，有必要尋找新的生物標(biāo)志物鑒別PCC/PGL的良、惡性。microRNA(miRNAs)在多種腫瘤中異常表達(dá)，參與腫瘤的發(fā)病機(jī)制。許多研究表明miRNAs可作為腫瘤鑒別診斷、預(yù)后預(yù)測的生物標(biāo)志物。本研究擬檢測miR-483

2、-5p、miR-183、miR-210和miR-21四種miRNA在PCC/PGL中的表達(dá)，分析其與臨床特征之間的關(guān)系。
　　 方法：
　　 1、用Trizol法分別提取PCC(n=32)、PGL(n=24)腫瘤組織和正常腎上腺髓質(zhì)(n=6)的總RNA，分別用miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物進(jìn)行miRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得micDNA，用SYBRGreen染料法進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢

3、測不同組織中miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21的相對表達(dá)量。
　　 2、分析miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21的表達(dá)與PCC/PGL臨床特征的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1、miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21在惡性PCC/PGL患者腫瘤組織中表達(dá)均分別高于良性PCC/PGL(P＜0.05);后兩者與正常腎上腺髓質(zhì)之間差

4、異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　 2、miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21在惡性PCC與PGL、良性PCC與PGL之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　 3、miR-483-5p、miR-210和miR-21在惡性PCC腫瘤組織中的表達(dá)均高于正常腎上腺髓質(zhì)(P＜0.05)；
　　 4、miR-483-5p、miR-210在惡性PGL腫瘤組織中的表達(dá)均高于正常腎上腺髓質(zhì)(P＜0.05);miR-21在惡性

5、PGL腫瘤組織中的表達(dá)有高于正常腎上腺髓質(zhì)的趨勢(p=0.077)
　　 5、VHL病PCC組織中miR-483-5p、miR-183、miR-210、miR-21的表達(dá)
　　 1)VHL病患者PCC組織中僅miR-210表達(dá)高于惡性PCC(P＜0.05)，而miR-483-5p、miR-183、miR-21的表達(dá)水平與惡性PCC差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 2)VHL病患者PCC組織的miR-483

6、-5p、miR-183、miR-210、miR-21表達(dá)均高于良性PCC(P＜0.05)
　　 6、miR-483-5p、miR-183、miR-210、miR-21的表達(dá)與PCC/PGL患者臨床特征的關(guān)系
　　 1)miR-21表達(dá)在多發(fā)腫瘤中高于單發(fā)者(P＜0.01)，而miR-483-5p、miR-183、miR-210的表達(dá)在兩者間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2)miR-483-5p、miR

7、-183、miR-210、miR-21在患者性別、年齡及不同腫瘤部位、大小、Ki-67％水平等臨床特征之間比較均未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21在惡性PCC/PGL組織中的高表達(dá)，對鑒別良、惡性腫瘤可能有一定意義;而僅有miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21高表達(dá)而無臨床惡性證據(jù)者需密切隨訪。
　

8、　 2、miR-483-5p、miR-183、miR-210、miR-21在VHL病的PCC腫瘤組織中呈高表達(dá)，其臨床意義有待進(jìn)一步研究。
　　 第二部分，嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤患者血清中miR-483-5p、m1R-21、miR-210的研究
　　 目的：
　　 第一部分的結(jié)果表明惡性嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤(PCC/PGL)組織中miR-483-5p、miR-21和miR-210的表達(dá)較良性者明顯升高。本部分

9、擬檢測PCC/PGL患者血清中miR-483-5p、miR-21和miR-210的表達(dá)情況，探討miR-483-5p、miR-21和miR-210在PCC/PGL患者血清與腫瘤組織中表達(dá)的相關(guān)性及手術(shù)治療前后血清中的表達(dá)變化。
　　 方法：
　　 1、用MaxRecoveryTMBiooPureTMRNAIsolationReagent分別提取PCC(n=9)，PGL(n=13)術(shù)前、術(shù)后血清的總RNA，分別用miR-4

10、83-5p、miR-210和miR-21莖環(huán)引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄獲得micDNA，用SYBRGreen染料法進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測血清中miR-483-5p、miR-210和miR-21的相對表達(dá)量。2、分析腫瘤組織和血清中miR-483-5p、miR-210和miR-21表達(dá)的相關(guān)性。3、比較PCC/PGL患者術(shù)前與術(shù)后血清中miR-483-5p、miR-210和miR-21的表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、PCC/PG

11、L患者血清中能檢測到miR-483-5p、miR-210和miR-21的表達(dá)。
　　 2、血清與組織中miR-483-5p、miR-210和miR-21水平未見明顯相關(guān)。
　　 3、miR-483-5p、miR-21表達(dá)水平在PCC/PGL患者術(shù)后血清均下降(P＜0.05)，miR-210有下降的趨勢(P=0.082)。
　　 結(jié)論：
　　 1、PCC/PGL患者血清中能檢測到miR-483-5p、miR

12、-210和miR-21的表達(dá)
　　 2、手術(shù)治療后PCC/PGL血清中miR-483-5p、miR-210和miR-21表達(dá)水平較術(shù)前不同程度下降，提示上述miRNAs可能對術(shù)后監(jiān)測有一定意義。
　　 第三部分，PCC/PGL腫瘤組織中HIF-1α、HIF-2α、SDHD、SDHB、PTENmRNA的表達(dá)與miR-21、miR-210的關(guān)系
　　 目的：
　　 以低氧誘導(dǎo)因子(HIF)活化為中心的PI3K

13、/PTEN/ARK/HIF信號通路在PCC/PGL的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。miR-210受缺氧誘導(dǎo)產(chǎn)生，靶向調(diào)節(jié)SDHD基因的表達(dá)。miR-21處于缺氧活化的上游通路中，靶向調(diào)節(jié)PTEN基因表達(dá)。本部分?jǐn)M檢測PCC/PGL組織中HIF-1α、HIF-2α、SDHD、SDHB及PTEN的mRNA水平，探討miR-210、miR-21與HIF表達(dá)之間的關(guān)系，miR-210與SDH、miR-21與PTEN表達(dá)之間的關(guān)系。
　　 方法：

14、
　　 1、用Trizol法分別提取PCC(n=32)、PGL(n=24)腫瘤組織和正常腎上腺髓質(zhì)(n=6)的總RNA，經(jīng)Oligo(dT)18逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，用SYBRGreen染料法進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測上述標(biāo)本中HIF-1α、HIF-2α、SDHD、SDHB和PTEN的相對表達(dá)量。
　　 2、分析腫瘤組織中HIF-1α、HIF-2α、SDHD、SDHB和PTENmRNA表達(dá)水平與腫瘤良惡性的關(guān)系。
　　

15、3、分析腫瘤組織中HIF-1α、HIF-2αmRNA與miR-210、miR-21，SDHD、SDHBmRNA與miR-210，PTENmRNA與miR-21之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1、HIF-1α、HIF-2α、SDHD、SDHB和PTENmRNA表達(dá)水平與腫瘤良惡性的關(guān)系
　　 1)HIF-1αmRNA在惡性PGL腫瘤組織中的表達(dá)有高于良性PCC/PGL、正常腎上腺髓質(zhì)的趨勢（P值分別為0.063，

16、0.055，0.090）。良性PCC和PGL腫瘤組織中HIF-1αmRNA表達(dá)與正常腎上腺髓質(zhì)之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2)SDHBmRNA在惡性PGL/PCC、良性PGL中的表達(dá)低于正常腎上腺髓質(zhì)(P均＜0.05)，SDHDmRNA在良性PGL、惡性PCC的表達(dá)低于正常腎上腺髓質(zhì)（P均＜0.05）。
　　 3)HIF-2α、PTENmRNA在良、惡性PCC，良、惡性PGL和正常腎上腺髓質(zhì)之間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

17、
　　 2、mRNA與miRNA的表達(dá)
　　 1)miR-21、miR-210表達(dá)水平與HIF-1αmRNA水平呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.335(P=0.013)和0.466(P＜0.001)
　　 2)miR-21、miR-210表達(dá)水平與HIF-2αmRNA水平之間未見明顯相關(guān)，p值分別為0.116，0.076。
　　 3)miR-210表達(dá)水平與SDHB、SDHDmRNA水平之間未見明顯相關(guān)，p值

18、分別為0.400，0.184。
　　 4)miR-21表達(dá)水平與PTENmRNA水平之間未見明顯相關(guān)（P=0.141）。
　　 結(jié)論：
　　 1、miR-21、miR-210表達(dá)水平與HIF-1αmRNA相關(guān)，與HIF-2αmRNA未見明顯相關(guān)。miR-21與PTENmRNA未見明顯相關(guān)。miR-210與SDHB、SDHDmRNA未見明顯相關(guān)。
　　 2、HIF-1αmRNA表達(dá)在惡性PGL患者腫瘤組織中