人羊膜間充質(zhì)干細胞對實驗性類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療作用.pdf

1、目的：探討人羊膜間充質(zhì)干細胞(human amnion-derived mesenchymal stem cells，hAMSCs)移植治療小鼠類風濕性關(guān)節(jié)炎的療效和免疫調(diào)節(jié)機制，為人羊膜間充質(zhì)干細胞用于類風濕性關(guān)節(jié)炎治療提供實驗依據(jù)和理論支持。
　　 方法：采用完全福氏佐劑關(guān)節(jié)腔注射制備小鼠類風濕關(guān)節(jié)炎模型，體外培養(yǎng)、擴增hAMSCs，尾靜脈注射移植，觀察治療前后小鼠一般狀況；容積法測定關(guān)節(jié)容積，計算關(guān)節(jié)腫脹程度；動態(tài)監(jiān)測外周

2、血血象；X光檢查受累關(guān)節(jié)形態(tài)變化，HE染色和免疫組化染色后，圖像分析和顯微鏡下觀察關(guān)節(jié)組織病理學變化；流式細胞儀檢測外周血T淋巴細胞亞群變化。
　　 結(jié)果：hAMSCs移植治療類風濕關(guān)節(jié)炎模型鼠的活動自如，進食正常、皮毛光亮、反應(yīng)敏捷，體重呈逐漸增長趨勢，未見明顯不良反應(yīng)。hAMSCs移植治療第42d，hAMSCs移植組關(guān)節(jié)腫脹抑制率較陽性藥組(給予甲氨喋呤)高，分別為18.72±4.57％和12.73±2.87％(P<0.05

3、)，受累關(guān)節(jié)腫脹緩解程度明顯優(yōu)于陽性藥組。外周血象檢查結(jié)果顯示：hAMSCs移植組治療前后小鼠各項血細胞指標變化不大，陽性藥組在治療后第11-19 d外周血象中各項指標明顯下降。X線檢查結(jié)果顯示：與模型組和陽性藥組比較，hAMSCs移植組小鼠左側(cè)后肢足爪腫脹明顯較輕，未見明顯骨膜反應(yīng)、骨質(zhì)疏松或骨質(zhì)破壞。病理組織檢查可見：與模型組、MTX組比較，hAMSCs移植組小鼠關(guān)節(jié)炎癥緩解明顯，關(guān)節(jié)組織未見明顯炎性細胞浸潤，滑膜組織炎性增生及新生

4、血管形成不明顯，無骨軟化、骨破壞缺失，關(guān)節(jié)腔、骨膜、軟骨、骨組織結(jié)構(gòu)層次較清楚、完整。免疫組化檢測OPG表達情況發(fā)現(xiàn)：hAMSCs移植組OPG表達IOD為88.96±16.29，而MTX組則是62.76±10.7，模型組較低為39.22±11.82，而空白組則是28.57±7.4(P<0.01)。流式細胞術(shù)檢測分析：各實驗組均不表達CD3+CD4+CD137+。治療第20d，hAMSCs移植組CD3+CD4+CD28-為59.11±1.

5、61(％)較空白組和模型組低，后兩組分別為65.37±4.52(％)和69.85±2.48(％)；CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CD4+CD25+百分率，在3組間比較無明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)。治療第30d，MTX組CD8+陽性細胞百分率和CD4+/CD8+分別為37.22±2.02(％)和1.51±0.14(％)較模型組略有增高，分別為26.27±7.57(％)和2.11±0.54(％)；而MTX組CD4+、CD4+C

6、D25+和CD3+CD4+CD28-(％)與空白組、模型組比較，無明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)；hAMSCs移植組CD8+、CD4+/CD8+為38.91±6.46(％)和1.38±0.36(％)較模型組CD8+細胞有所增高(P<0.05)，模型組為26.27±7.57(％)和2.11±0.54(％)；hAMSCs移植組CD4+CD25+為1.03±0.28(％)較MTX組明顯增高(P<0.01)；hAMSCs移植組CD4+、CD3+