Galectin-3基因多態(tài)性與乳腺癌相關(guān)性的研究及聚腺苷酸二磷酸核糖(PAR)在三陰性乳腺癌中表達(dá)的初步探討.pdf

1、目的：
　　rs4644是 galectin-3基因編碼區(qū)的單核苷酸多態(tài)(single nucleotide polymorphism，SNP)位點(diǎn)，該位點(diǎn)處等位基因C被A所替換，導(dǎo)致galectin-3蛋白序列的第191位的氨基酸由脯氨酸（P）變?yōu)榻M氨酸(H)。從而影響galectin-3的生物學(xué)行為。本研究旨在通過分析rs4644在乳腺癌患者中的分布情況，探討rs4644與中國(guó)女性乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。
　　聚腺苷酸二

2、磷酸核糖核苷酸聚合酶-1(poly(ADP-ribose)polymerase-1，PARP-1)是一種 DNA損傷修復(fù)酶，它可以催化合成聚腺苷酸二磷酸核糖(pol（ADP-ribose），PAR)，參與DNA損傷的修復(fù)過程。PAR可以反映細(xì)胞內(nèi)PARP-1活性，被認(rèn)為是一種潛在的預(yù)測(cè) PARP-1抑制劑治療敏感性的生物標(biāo)記分子。rs1136410是PARP-1單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（single nucleotide polymorphi

3、sm，SNP），它可以影響PARP-1活性。雖然PARP-1抑制劑在三陰性乳腺癌治療已經(jīng)進(jìn)入Ⅲ期臨床試驗(yàn)，但是可靠的評(píng)估 PARP-1抑制劑治療敏感性的生物標(biāo)記分子是缺乏的。因此，我們的實(shí)驗(yàn)旨在分析PAR在三陰性和非三陰性乳腺癌的表達(dá)差異以及PARP-1活性位點(diǎn)rs1136410與PAR表達(dá)的相關(guān)性。
　　方法：
　　應(yīng)用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（reaction-restriction fragment lengt

4、h polymorphism，PCR-RFLP）方法檢測(cè)172例乳腺癌患者凍存腫瘤組織和17例新鮮良性乳腺組織 rs4644基因型，隨機(jī)選取10例 PCR樣本測(cè)序，驗(yàn)證PCR-RFLP的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　使用PAR抗體（MA1-9043910H Thermo）,運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)32例三陰性以及39例非三陰性乳腺癌的石蠟固定標(biāo)本，并同時(shí)提取相對(duì)應(yīng)病例的凍存組織的基因組DNA，檢測(cè)rs1136410等位基因的位點(diǎn)差異。

5、r>　　結(jié)果：
　　1. PCR產(chǎn)物經(jīng)NCOI酶切后，野生純合子（CC）型為324bp一條帶；雜合子（CA）型為324bp、171bp和153 bp三條帶；突變純合子(AA)為171、153雙條帶。由于2％瓊脂糖凝膠電泳無法分辨171bp和153bp條帶，僅顯示160bp左右融合條帶（圖1）。隨機(jī)抽取10例PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果與電泳一致。
　　2.乳腺癌組基因型分布為CC型125例（72.7％），CA型43例（25.0％），A

6、A型4例（2.3%）；C、A等位基因頻率分別為293（85.2％），51（14.8％）；對(duì)照組基因型分布為CC型9例（52.9％），CA型7例（41.2％），AA型1例（5.9%）；C、A等位基因的頻率分別為25（73.5％），9（26.5％）。兩組基因型及等位基因頻率分布均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3. rs4644 A等位基因更容易出現(xiàn)在腫物 T＞2cm及 ki-67<14%的乳腺癌人群（P<0.05），而與患者年齡，組織學(xué)分級(jí)

7、，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，受體狀態(tài)及p53表達(dá)無明顯相關(guān)性。
　　4.免疫組化染色結(jié)果顯示 PAR呈現(xiàn)不同的細(xì)胞定位著色，大部分病例為強(qiáng)-中等的細(xì)胞核著色，另一部分病例為中等細(xì)胞質(zhì)著色，PAR的著色特點(diǎn)與我們之前報(bào)道 PARP-1著色定位相似。
　　5.在三陰性乳腺癌中，62.5%的病例表現(xiàn)為胞核PAR低表達(dá)，而37.5%的病例表現(xiàn)為胞核PAR高表達(dá)；與此相反，在非三陰性乳腺癌中，僅28.2%病例表現(xiàn)為核PAR低表達(dá)，而71.8%的病例

8、表現(xiàn)為核PAR高表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示在非三陰性乳腺癌中，核 PAR高表達(dá)比例明顯高于三陰性乳腺癌（χ2=8.404，P=0.004）。
　　6.胞質(zhì)PAR表達(dá)的陽性比例與陰性比例在三陰性乳腺中均為50%;在非三陰性乳腺癌中，20.5%病例表現(xiàn)為胞質(zhì)PAR的陽性表達(dá)，79.5%的病例表現(xiàn)為陰性表達(dá)；三陰性乳腺癌胞質(zhì) PAR的陽性表達(dá)明顯高于非三陰性乳腺癌（χ2=6.830，P=0.009）。
　　7.不考慮是三陰性還是非三陰性

9、乳腺癌來源，我們整體比較核 PAR和胞質(zhì)PAR表達(dá)的相關(guān)性，分析結(jié)果顯示，46.5%的病例表現(xiàn)為核 PAR高表達(dá)而胞質(zhì)PAR陰性表達(dá)；23.9%病例表現(xiàn)胞質(zhì)PAR陽性表達(dá)而核PAR低表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示胞質(zhì)PAR與核PAR表達(dá)成負(fù)相關(guān)（r=-0.391，P=0.001）。
　　8.細(xì)胞內(nèi)PAR的水平可能會(huì)依賴于PARP-1表達(dá)高低，基于這一假設(shè)，我們分析PAR與PARP-1表達(dá)的關(guān)系（PARP-1的表達(dá)已在之前文章報(bào)道），分別比較

10、二者胞核和胞質(zhì)表達(dá)發(fā)現(xiàn)，11.3%病例表現(xiàn)為核 PAR高表達(dá)而核PARP-1低表達(dá),24.0%病例表現(xiàn)為核 PARP-1高表達(dá)而核 PAR低表達(dá)（P=0.054）;21%病例表現(xiàn)為胞質(zhì)PAR陽性表達(dá)而胞質(zhì)PARP-1陰性表達(dá)，12.7%病例表現(xiàn)為胞質(zhì)PARP-1陽性表達(dá)而胞質(zhì)PAR陰性表達(dá)（P=0.448）。無論是胞質(zhì)還是胞核表達(dá)，均未發(fā)現(xiàn)PAR與PARP-1表達(dá)的明顯的相關(guān)性。
　　9.分別比較胞質(zhì)PAR及胞核PAR表達(dá)與rs1

11、136410基因型以及等位基因頻率之間關(guān)系，未見明顯的相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　1. Galectin-3基因191位基因多態(tài)性 rs4644與乳腺癌的發(fā)生無明顯相關(guān)性，其與腫瘤大小及ki-67密切相關(guān)，提示rs4644在腫瘤生長(zhǎng)及耐藥過程中發(fā)揮一定生物學(xué)功能。
　　2.三陰性乳腺癌更常表現(xiàn)為胞質(zhì)PAR陽性表達(dá)而核PAR低表達(dá)模式，然而，非三陰性乳腺癌中,核PAR高表達(dá)則更為常見;胞質(zhì)PAR和胞核PAR表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)