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文檔簡介
1、視網(wǎng)膜疾病主要是由于興奮性氨基酸受體如N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)受體被過激活,導致大量過氧化脂質(zhì)產(chǎn)物如丙二醛(MDA)生成,以及超氧化物歧化酶(SOD)活性抑制,同時誘導視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細胞層(RGCL)神經(jīng)元凋亡導致視功能不可逆性損害。目前治療視網(wǎng)膜疾病的藥物主要包括Lucentis、蛋白激酶 C抑制劑等,但由于效果欠佳、副作用較大,因此迫切的需要開發(fā)出有效治療視網(wǎng)膜疾病的藥物。本研究室的前期研究結(jié)果表明丹七散提取物(DQS)對視
2、網(wǎng)膜具有潛在的保護作用,并認為可能與抑制β-catenin通路過度激活有關(guān)。
為了闡明其改善NMDA誘導大鼠視網(wǎng)膜損傷的物質(zhì)基礎和藥理學機制,本研究首先采用HPLC法測定丹七散提取物中的淫羊藿苷和木犀草素含量進行質(zhì)量控制。隨后,分別建立體內(nèi)視網(wǎng)膜病變動物模型和體外 RGC-5視神經(jīng)細胞培養(yǎng)系,利用TUNEL法、免疫染色法和Western-blotting法等生物技術(shù),檢測神經(jīng)細胞凋亡以及caspase、β-catenin、CO
3、X-2、VEGF等因子的蛋白含量表達變化,研究丹七散對大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層(GCL)細胞的保護作用機制。
HPLC測定結(jié)果:淫羊藿苷在進樣濃度為0.02~0.16 mg·mL-1(R2=0.999)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均加樣回收率為97.87%,RSD為2.84%。木犀草素在進樣濃度為0.008~0.064 mg·mL-1(R2=0.9998)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均加樣回收率為98.43%,RSD為1.62%。
4、 動物實驗結(jié)果:DQS中劑量組大鼠視網(wǎng)膜 GCL細胞數(shù)目明顯大于 NMDA組。DQS能上調(diào)大鼠血清SOD/MDA值;DQS能顯著抑制NMDA所致的GCL細胞凋亡;DQS組中GCL層caspase-3陽性細胞數(shù)明顯低于NMDA組,DQS組中Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-8、Cleaved caspase-9的蛋白表達水平均低于NMDA組。相對于NMDA組,DQS組下調(diào)視網(wǎng)膜中β-catenin、COX
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