貓人參醇提取物對胃癌前病變大鼠干預的機制研究.pdf

1、研究背景和內(nèi)容:
　　胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，早期診斷早期治療比較困難，晚期治療預后不良。但胃癌的發(fā)生是個漫長的過程，從炎癥——異型增生——癌變一般需要10-20年。在癌變前的階段進行預防和治療，能延緩異型增生的進程，減少腫瘤的發(fā)生。中醫(yī)藥在治療胃癌前病變(PLGC)上具有優(yōu)勢和特色。貓人參是獼猴桃科植物，功效為清熱解毒，祛風除濕消腫，臨床主要用于麻風、消化系統(tǒng)腫瘤等的治療。課題組經(jīng)臨床實踐發(fā)現(xiàn)貓人參能改善PLGC的病理狀

2、態(tài)，結合文獻研究發(fā)現(xiàn)貓人參主要的活性成分能抑制腫瘤細胞的生長。本研究主要通過貓人參醇提取物作用于PLGC大鼠的實驗，來探討貓人參醇提取物治療PLGC的療效和機制。
　　全文分為兩個部分，第一部分文獻研究主要總結了中西醫(yī)學對PLGC的病因病機、治療、實驗等方面的研究成果及現(xiàn)階段對貓人參的認識。第二部分實驗研究建立了PLGC大鼠模型，研究貓人參醇提取物治療和延緩PLGC，阻斷胃癌發(fā)生發(fā)展的分子作用機制。
　　研究目的:
　

3、　研究貓人參醇提取物對PLGC大鼠胃黏膜病理變化、細胞增殖和細胞凋亡相關因子以及mTOR信號通路的影響.
　　研究方法:
　　100只5周齡左右SD雄性大鼠，適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分為空白組10只，造模組90只?？瞻捉M給予正常飲食，造模組給予100ug/ml MNNG自由飲用，0.03％雷尼替丁的標準鼠料，造模開始1-6周每周1次10％氯化鈉溶液1ml灌胃。結合前期實驗的經(jīng)驗，從造模22周起每周處死2只大鼠取胃組織觀察病理形

4、態(tài)學變化，確認是否造模成功。24周造模成功后，將存活的84只PLGC大鼠隨機分為4組，貓人參醇提取物常規(guī)劑量組(0.03g/kg/d醇提取物灌胃)、高劑量組（0.06g/kg/d貓人參醇提取物灌胃）、維甲酸組（0.04g/kg/d灌胃）、模型組。模型組和空白組給予等劑量生理鹽水灌胃。治療持續(xù)16周后處死所有大鼠，通過HE染色、免疫組化、western blot技術檢測大鼠胃黏膜病理變化、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cycli

5、nD1基因的表達以及mTOR信號轉導通路上相關蛋白的表達。
　　研究結果:
　　1.空白組10只大鼠，1只死于灌胃不當，3只正常，6只慢性淺表性胃炎(CSG)，無腸上皮化生(IM)和異型增生(Dys)。模型組21只大鼠，1只死于灌胃不當，2只死于胃癌，CSG8只，CAG5只，IM6只，Dys9只以IM和Dys算PLGC發(fā)生率為15只(83.3％)。貓人參醇提取物常規(guī)劑量組21只大鼠，1只死于灌胃不當，1只死于不明原因，CSG

6、11只，CAG2只，IM3只，Dys4只，PLGC7只(36.8％)。貓人參醇提取物高劑量組21只大鼠，2只死于灌胃不當，CSG12只，CAG2只，IM3只，Dys2只，PLGC5只(26.3％)。維甲酸組21只大鼠，2只死于不明原因，CSG8只，CAG4只，IM4只，Dys3只，PLGC7只(36.8％)。模型組和空白組比較， PLGC發(fā)生率明顯升高(P＜0.01)，和治療組相比也有顯著差異(P＜0.05)。各治療組之間比較PLGC發(fā)

7、生率無顯著差異(P＞0.05)。
　　2.Bcl-2、Bax、Caspase-3、CyclinD1蛋白陽性反應成棕黃色。經(jīng)過MNNG造模的大鼠Bcl-2、CyclinD1表達增加。和空白組相比，模型組表達最為明顯(P＜0.01)，貓人參醇提取物和維甲酸對Bcl-2、CyclinD1表達表現(xiàn)出一定的調(diào)節(jié)作用。和模型組相比，貓人參醇提取物和維甲酸能降低Bcl-2、CyclinD1的表達(P＜0.01)。但貓人參醇提取物常規(guī)劑量組、高劑

8、量組和維甲酸組之間無明顯差異(P＞0.05)。經(jīng)過MNNG造模的大鼠Bax、Caspase-3表達降低。和空白組相比，模型組表達下降最為明顯(P＜0.01)，貓人參醇提取物和維甲酸對Bax、Caspase-3有一定的調(diào)節(jié)作用。和模型組相比，貓人參醇提取物和維甲酸能增加Bax、Caspase-3的表達(P＜0.01)。但貓人參醇提取物常規(guī)劑量組、高劑量組和維甲酸組之間無明顯差異(P＞0.05)。
　　3.空白組PI3K、p-Akt、

9、mTOR幾乎無陽性表達。貓人參醇提取物常規(guī)劑量組、高劑量組、維甲酸組PI3K、p-Akt、mTOR陽性表達有提高，和空門組比較有差異(P＜0.05)。模型組PI3K、p-Akt、mTOR陽性表達最高，和貓人參醇提取物常規(guī)劑量組、高劑量組、維甲酸組比較差異顯著(P＜0.05)。
　　4.免疫組化結果顯示各組胃黏膜上皮幾乎都無陽性表達的LKB1。Westem blot顯示與空白組比較，模型組LKB1表達降低。貓人參醇提取物和維甲酸有增

10、強LKB1水平的趨勢。
　　研究結論:
　　貓人參醇提取物能改善PLGC大鼠的一般狀況，延緩PLGC病理形態(tài)的加重，減少PLGC的發(fā)生率;可以抑制PLGC大鼠胃黏膜上皮Bcl-2、CyclinD1蛋白的表達，提高PLGC大鼠胃黏膜上皮Bax、Caspase-3蛋白的表達;可以抑制PI3K/Akt/mTOR通路相關蛋白的表達，促進LKB1的陽性表達。
　　通過作用于mTOR信號通路，調(diào)節(jié)相關蛋白的表達，影響下游細胞增殖和