網(wǎng)狀玻璃碳聯(lián)合犬骨髓基質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)及體內(nèi)組織相容性的實驗研究.pdf

1、目的：本研究旨在通過體外實驗明確網(wǎng)狀玻璃碳無毒性且有利于細胞生長，通過體內(nèi)實驗將網(wǎng)狀玻璃碳植入股骨大轉(zhuǎn)子6周、12周后采用組織病理切片，masson染色觀察骨組織與網(wǎng)狀玻璃碳的組織相容性。
　　方法：體外實驗：提取犬的股骨干遠端的骨髓基質(zhì)干細胞，采用差數(shù)貼壁和培養(yǎng)基選擇法提取骨髓基質(zhì)干細胞，在體外培養(yǎng)傳代，取第3代細胞系通過細胞流式分析法進行細胞鑒定。通過MTT實驗檢測網(wǎng)狀玻璃碳的細胞毒性。取第3代細胞，以2.0×109 L-1的

2、細胞濃度種植在網(wǎng)狀玻璃碳表面，聯(lián)合培養(yǎng)14d后觀察細胞的黏附與增殖情況。體內(nèi)實驗：選取犬為實驗動物，手術(shù)切開暴露股骨大轉(zhuǎn)子，用鉆頭從股骨頸長軸與股骨外側(cè)交點沿著股骨頸方向鉆孔到達軟骨下4-5mm處后植入網(wǎng)狀玻璃碳，在術(shù)后6周、12周分批將犬處死，取植入材料的大轉(zhuǎn)子處標(biāo)本，采用固定、脫鈣液脫鈣，做病理切片，行masson染色觀察骨組織及結(jié)締組織在網(wǎng)狀玻璃碳的長入情況。
　　結(jié)果：(1)倒置顯微鏡觀察結(jié)果顯示：網(wǎng)狀玻璃碳聯(lián)合犬骨髓基質(zhì)

3、干細胞培養(yǎng)7天后材料近周細胞較少，材料外圍有較多的細胞黏附生長；14天后細胞逐漸向支架材料靠近，材料表面及材料各個空隙內(nèi)都有大量的細胞黏附，并有少量的細胞基質(zhì)分泌；21天后細胞大量增殖，連接成片，填充在材料表面及空隙內(nèi)，并有大量的細胞基質(zhì)分泌，部分細胞出現(xiàn)接觸性抑制。(2)掃描電鏡觀察結(jié)果顯示：細胞與材料共同培養(yǎng)14天后，細胞大多呈梭形，部分為多角形，延展性良好，細胞周圍有大量細胞外基質(zhì)，少量細胞伸出偽足黏附于材料表面及空隙中。(3)體