PKCγ在中樞神經(jīng)中的分布與作用機理的探索.pdf

1、蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)是重要的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，但PKC的γ亞單位在大鼠神經(jīng)系統(tǒng)的作用機理目前還不十分明了，對PKC的γ亞單位研究將有助于為闡明PKCγ在痛信息傳遞和/或調(diào)節(jié)中的作用機制提供理論依據(jù)。本課題從不同角度研究PKCγ的作用機理，以期為闡明PKCγ在痛信息傳遞和/或調(diào)節(jié)中的作用機制提供理論依據(jù)。內(nèi)容包括以下四個方面： 第一部分：應(yīng)用PKCγ特異性抗體的免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)觀察蛋白激酶C

2、γ亞單位(PKCγ)在大鼠神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的定位分布。研究發(fā)現(xiàn)PKCγ陽性神經(jīng)元廣泛分布于大鼠神經(jīng)系統(tǒng)，密集、濃染的PKCγ陽性神經(jīng)元主要見于大腦皮質(zhì)、海馬、杏仁復(fù)合體、小腦皮質(zhì)、耳蝸腹側(cè)核和耳蝸背側(cè)核。本研究的結(jié)果為探討PKCγ在神經(jīng)系統(tǒng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的作用提供了形態(tài)學(xué)證據(jù)。 第二部分：研究大鼠延髓背角和脊髓背角淺層內(nèi)蛋白激酶Cγ亞單位(PKCγ)陽性神經(jīng)元向中縫蒼白核(NRP)的投射。采用熒光金(FG)逆行追蹤和PKCγ免疫熒光組

3、織化學(xué)染色相結(jié)合的雙標(biāo)記方法。在延髓和脊髓背角的Ⅰ～Ⅲ層內(nèi)可見FG逆標(biāo)神經(jīng)元；PKCγ陽性神經(jīng)元主要分布于延髓和脊髓背角的Ⅱ?qū)觾?nèi)側(cè)部及Ⅱ、Ⅲ層交界處，Ⅰ、Ⅱ工層內(nèi)較少。提示延髓和脊髓背角淺層向NRP投射的神經(jīng)元是PKCγ神經(jīng)元，提示PKCγ在向NRP傳遞的信息的通路中可能發(fā)揮重要作用。 第三部分：應(yīng)用免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)記染色方法研究PKCγ在延髓和脊髓背角淺層與PV，CB，CR的共存關(guān)系。結(jié)果提示大部分PKCγ，CB，CR和P

4、V樣免疫陽性神經(jīng)元分布于Ⅱ?qū)?，其中也有少量神?jīng)元分布于Ⅰ層和Ⅲ層。結(jié)論提示PKCγ與鈣調(diào)蛋白的共存神經(jīng)元在口面部傳遞痛信息的通路中可能發(fā)揮重要作用。 第四部分：探討大鼠坐骨神經(jīng)切斷模型脊髓背角內(nèi)PKCγ的變化及意義。在坐骨神經(jīng)切斷后2、5、10、15、20、30、40、60d，取脊髓背角，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行染色，圖像分析軟件測量并比較脊髓背角手術(shù)側(cè)和對照側(cè)的免疫強度。從第2天開始，手術(shù)側(cè)脊髓背角L4-L5節(jié)斷PKCγ免疫陽