根蟲瘟霉胞外蛋白酶系的誘導表達特性及蛋白酶類型分析.pdf

1、胞外蛋白酶是昆蟲病原真菌入侵寄主過程中的一個重要毒力因子，在降解昆蟲體壁，感染并致死寄主過程中發(fā)揮著關鍵的作用。而胞外蛋白酶具有高度的基質特異性，且極易受底物的誘導調控。本研究將通過對根蟲瘟霉(Zoophthoraradicans)原始菌株以及轉寄主菌株在不同培養(yǎng)條件下胞外蛋白酶活和電泳酶譜的變化分析，結合采用不同蛋白酶抑制劑對相關胞外蛋白酶類型的鑒定，證實了根蟲瘟霉菌株擁有豐富的胞外蛋白酶類型，并能根據外界不同底物對蛋白酶系采取選擇性

2、表達。表明菌株在轉寄主過程中特異性胞外蛋白酶的消失或誘導表達有可能是針對不同寄主的毒力相關因子。菌株在不同培養(yǎng)條件下表達的胞外蛋白酶活的差異通過對根蟲瘟霉原始菌株R0、轉寄主菌株R1和R5在不同培養(yǎng)條件下誘導胞外蛋白酶活差異的比較，發(fā)現在含昆蟲表皮和明膠的培養(yǎng)基中，均能誘導表達高水平的胞外蛋白酶，說明胞外蛋白酶易受外源蛋白的誘導產生；而在營養(yǎng)極度缺乏的MS培養(yǎng)基中，胞外蛋白酶的表達水平均很低。有趣的是，在營養(yǎng)豐富的薩氏培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5-

3、15天時根蟲瘟霉表達的胞外蛋白酶活水平也很低，而培養(yǎng)30天有所上升，特別是轉寄主菌株R5表現更為明顯，至30天酶活達到最高峰。該現象表明當環(huán)境中易用物過于富余時，菌株不會浪費能量去合成暫不需要的酶類。因此，胞外蛋白酶的誘導產生還跟外界營養(yǎng)物的缺乏有關。 菌株在不同培養(yǎng)條件下誘導表達的胞外蛋白酶條帶分析37KD的蛋白酶條帶在任何條件下都能被誘導表達，是各菌株中的保守序列所編碼的胞外蛋白酶。46KD的蛋白酶條帶僅能在含明膠的培養(yǎng)基中

4、被誘導表達，而葡萄糖可抑制其表達。在薩氏培養(yǎng)基中，67KD的蛋白酶條帶在轉寄主過程中消失了，而46KD和117KD的蛋白酶條帶隨著轉寄主傳代數增加而明顯，表明菌株在轉染過程中選擇表達了對新寄主具有較高基質特異性的胞外蛋白酶。從轉寄主前后胞外蛋白酶誘導表達的差異比較，可以推測67KD的胞外蛋白酶可能是針對原始寄主大菜粉蝶的毒力相關因子，而46KD和117KD的蛋白酶條帶則有可能是針對新寄主小菜蛾的毒力相關因子。 誘導表達的胞外蛋白