減毒活菌卡介苗對(duì)支氣管哮喘小鼠Toll樣受體4表達(dá)和細(xì)胞因子水平的影響.pdf

1、目的：通過減毒活菌卡介苗干預(yù)支氣管哮喘小鼠，觀察支氣管哮喘小鼠支氣管肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量的改變以及病理切片中肺部炎癥情況，脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4、IL-5及IFN-γ細(xì)胞因子水平的改變，血清中IgE水平的變化，肺組織Toil樣受體4表達(dá)的變化，探討Toil樣受體4介導(dǎo)的減毒活菌卡介苗在支氣管哮喘免疫治療中的作用，為減毒活菌卡介苗的作用機(jī)制提供依據(jù)。 方法：昆明小鼠以卵白蛋白致敏激發(fā)建立哮喘模型并小劑量減毒活

2、菌卡介苗接種，最后一次抗原激發(fā)24小時(shí)內(nèi)留取所需標(biāo)本。收集支氣管肺泡灌洗液，計(jì)數(shù)支氣管肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量。肺組織病理切片觀察哮喘小鼠肺組織炎癥情況及特征性嗜酸性粒細(xì)胞。制備脾細(xì)胞懸液，ELISA法檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4、IL-5及IFN-細(xì)胞因子的含量。左心室采血，ELISA法檢測(cè)血清中IgE的含量。Western Blotting、免疫組織化學(xué)、RT-PCR檢測(cè)肺組織Toll樣受體4的表達(dá)。 結(jié)果

3、： (1)卡介苗觀察組小鼠支氣管肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)與嗜酸粒細(xì)胞數(shù)量與哮喘組小鼠相比明顯減少，肺組織病理切片顯示氣道炎癥明顯減輕。 (2)ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，卡介苗觀察組小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4、IL-5水平與哮喘組小鼠相比顯著降低，IFN-γ水平顯著上調(diào)，血清中IgE的水平顯著降低。 (3)Western Blotting、免疫組織化學(xué)以及RT-PCR技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，卡介苗觀察組小鼠Toll樣受體4表達(dá)量

4、與哮喘組相比相對(duì)增強(qiáng)，與空白對(duì)照組相比顯著增強(qiáng)。 結(jié)論：減毒活菌卡介苗干預(yù)支氣管哮喘小鼠，通過上調(diào)Toil樣受體4的表達(dá)，啟動(dòng)了Toll樣受體4的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，從而引起機(jī)體的Th1型免疫反應(yīng)，脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4、IL-5水平顯著降低，IFN-γ水平顯著上調(diào)，其中IFN-γ是Th1型細(xì)胞因子，IL-4和IL-5是Th2型細(xì)胞因子，糾正了哮喘Th1/Th2失衡，減輕哮喘炎癥，小鼠支氣管肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)與嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)減少