早期接種減毒活菌卡介苗對支氣管哮喘幼鼠氣道炎癥和黏液分泌的預(yù)防作用.pdf

1、研究背景:支氣管哮喘(Asthma)是一種以肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞浸潤為主的慢性變態(tài)反應(yīng)性氣道炎癥，以黏液高分泌、氣道高反應(yīng)性、可逆性氣流受限和氣道重構(gòu)為特征。其中嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)在哮喘氣道的聚集是哮喘發(fā)作的一個(gè)中心環(huán)節(jié)，而黏液的高分泌是哮喘的特征性改變，可增加氣道高反應(yīng)性(AHR)和氣流受限，導(dǎo)致疾病的惡化和突然死亡。哮喘的發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，其中T淋巴細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子在氣道慢性炎癥中發(fā)揮重要作用，主要表現(xiàn)在T輔助細(xì)

2、胞(Th)亞群功能失調(diào)，越來越多研究表明TH2細(xì)胞在哮喘的發(fā)生發(fā)展中起了重要作用，它們通過釋放TH2型細(xì)胞因子如IL-4、IL-5等觸發(fā)炎性反應(yīng)，導(dǎo)致Eos在氣道募集并活化。而TH1細(xì)胞則具有與TH2細(xì)胞相反的作用，它們通過釋放TH1型細(xì)胞因子如IFN-γ、IL-12等拮抗TH2型細(xì)胞因子的功能而抑制哮喘反應(yīng)，故調(diào)節(jié)TH1/TH2細(xì)胞之間的平衡成為哮喘免疫治療的熱點(diǎn)之一。已發(fā)現(xiàn)卡介苗(BCG)作為非特異性免疫調(diào)節(jié)劑，是一種很強(qiáng)的TH1免

3、疫刺激劑，能夠提高TH1型細(xì)胞因子(如IFN-γ、IL-12)的表達(dá)，而抑制TH2型細(xì)胞因子(如IFN-γ、IL-12)的表達(dá)，降低Eos在氣道的聚集浸潤和AHR，并發(fā)現(xiàn)其能夠降低分布于氣道上皮的杯狀細(xì)胞(GC)的增生和化生，抑制GC的，降低黏液的形成，達(dá)到預(yù)防和治療哮喘的目的。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)給小鼠(成年或幼年)接種BCG后能夠明顯降低肺泡灌洗液(BALF)中Eos數(shù)，增加BALF中IFN-γ、IL-12水平，降低IL-4、IL-5

4、水平，并能夠顯著抑制氣道黏液的形成?；诖?，采用新生鼠，模擬人類卡介苗接種預(yù)防結(jié)核模式，在早期給予多次BCG接種，通過誘導(dǎo)機(jī)體向Th1型免疫優(yōu)勢應(yīng)答發(fā)展，觀察之后五周幼鼠經(jīng)抗原激發(fā)所致的哮喘發(fā)生情況。 研究目的:在成熟的哮喘模型基礎(chǔ)上，給新生幼鼠多次接種BCG，在小鼠幼年階段誘發(fā)哮喘，觀察BCG對哮喘幼鼠氣道炎癥、BALF中Eos水平及對氣道黏液分泌的影響，檢測BCG對哮喘幼鼠BALF及脾細(xì)胞上清液中的IL-4及IFN-γ水平所

5、產(chǎn)生的變化。 研究方法:選擇24小時(shí)剛出生C57BL/6新生幼鼠，早期接種BCG，待5周后以卵白蛋白(OVA)作為抗原進(jìn)行致敏和激發(fā)，建立哮喘幼鼠模型。選擇BCG接種的接種次數(shù)為3次(分別為0天、7天、14天)，BCG劑量為105。分為陰性對照組(A組)、致敏攻擊組(B組)、BCG皮下接種組(C組，105，105，105組)。在最后一次抗原激發(fā)后48小時(shí)分別記數(shù)BALF炎癥細(xì)胞，組織病理觀察肺組織炎癥和氣道黏液分泌，分別以杯狀細(xì)

6、胞化生指數(shù)——指每mm長氣管上皮中杯狀細(xì)胞數(shù)目；上皮黏液儲備指數(shù)——上皮過碘酸-雪呋(PAS)陽性染色面積比氣管上皮總面積，作為氣道黏液的定量觀察指標(biāo)。用ELISA法檢測BALF及脾細(xì)胞上清液中的IL-4及IFN-γ水平。 結(jié)論: 1.早期接種BCG可明顯抑制哮喘幼鼠BALFEos水平，抑制炎癥細(xì)胞尤其是Eos的氣道浸潤。 2.早期接種BCG可明顯降低哮喘幼鼠的GC的增生和肥大，抑制氣道黏液的形成。 3.