我國(guó)HIV-1重組毒株Tat蛋白的表達(dá)、純化及功能分析.pdf_第1頁(yè)
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1、通過(guò)對(duì)全國(guó)范圍艾滋病毒分子流行病學(xué)調(diào)查研究,我們發(fā)現(xiàn)B'和C亞型HIV-1在中國(guó)發(fā)生了重組,并觀察到了B'/C重組毒株在傳播過(guò)程中逐步取代了產(chǎn)代B'和C亞型HIV-1,這一發(fā)現(xiàn)提示雜交后的重組病毒可能具有了某種傳播優(yōu)勢(shì).在比較了120余個(gè)tat基因的序列后,發(fā)現(xiàn)中國(guó)B'/C重組毒株tat基因的變異類型可分為三類,分別與感染者血漿中的病毒載量的高低相對(duì)應(yīng),強(qiáng)裂提示tat基因的變異與病毒的生物學(xué)特性具有一定的關(guān)系.為闡明tat基因的變異與其

2、表型之間的關(guān)系,該文分別選取Tat蛋白三種不同變異類型的典型樣品為模板,采用套式PCR的方法擴(kuò)增目的片段,然后將其連接在原核表達(dá)載體pET30a上,利用T7 RNA聚合酶表達(dá)系統(tǒng)在E.ColiBL21(DE3)中高效表達(dá)目的基因,并通過(guò)金屬鏊合層析的方法純化Tat蛋白.經(jīng)Western Bolt鑒定后,利用熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng),在體外對(duì)Tat蛋白進(jìn)行生物學(xué)活性檢測(cè).分別把不同變異類型的Tat蛋白與報(bào)告質(zhì)粒pHIVLTR-luc共轉(zhuǎn)染HeLa

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