單細(xì)胞基因分析在霍奇金淋巴瘤H-R-S細(xì)胞性質(zhì)研究中的應(yīng)用.pdf

1、目的:應(yīng)用激光捕獲顯微切割系統(tǒng)(LCM)結(jié)合免疫組化標(biāo)記從組織切片中分離、獲取單細(xì)胞和少量背景細(xì)胞的方法，建立一套優(yōu)化的單細(xì)胞PCR反應(yīng)體系和條件，應(yīng)用于H/R-S細(xì)胞的起源和克隆性及其與背景淋巴細(xì)胞相關(guān)性的研究。 方法:聯(lián)合應(yīng)用LCM技術(shù)和免疫組化標(biāo)記定位，從4例CHL(包括2例MC型和2例NS型)石蠟包埋組織切片上挑選CD30陽性的H/R-S細(xì)胞和CD20陽性的背景B淋巴細(xì)胞，每組管收集3個R-S細(xì)胞和5-20個背景B淋巴細(xì)

2、胞。提取細(xì)胞DNA后采用K家族特異性引物中的Vk3/JK3，經(jīng)半巢式PCR檢測IgL基因重排。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)0.2％瓊脂糖凝膠電泳后在凝膠成像分析系統(tǒng)紫外投射儀下觀察目的條帶，統(tǒng)計學(xué)方法采用X<'2>檢驗。 結(jié)果:IgL基因重排擴(kuò)增結(jié)果：PCR產(chǎn)物目的條帶皆約為310bp，4例CHL中每3個H/R-S細(xì)胞的IgL基因重排陽性率分別為25.00％、33.33％、20.00％、21.44％，合計總陽性率25.29％，4例CHL之H

3、/R-S細(xì)胞IgL基因重排陽性率無顯著差異。本實驗還在相應(yīng)的病例中檢測到H/R-S細(xì)胞周圍的B淋巴細(xì)胞群存在克隆性IgL基因重排，重排條帶也都約為310bp。 結(jié)論: 1．H/R-S細(xì)胞存在克隆性IgL基因重排，進(jìn)一步支持大部分CHL中H/R-S細(xì)胞起源于B細(xì)胞。 2．每3個H/R-S細(xì)胞均出現(xiàn)相同的310bp擴(kuò)增產(chǎn)物，提示實驗所用的三個腫瘤細(xì)胞可能來自同-B細(xì)胞克隆，一定程度上說明了H/R-S細(xì)胞的單克隆性。