vWF和HDAC1對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823生物學(xué)行為影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：(1)研究血管性血友病因子(vWF)和組蛋白去乙?；?(HDACl)在人胃癌細(xì)胞BGC-823中的表達(dá)及其相互作用。 (2)探討vWF和HDACl對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823增殖、細(xì)胞形態(tài)、粘附、侵襲和遷移能力的影響及其作用機(jī)制。 方法：(1)采用免疫組織化學(xué)技術(shù)及RT-PCR法檢測(cè)抗體作用前后vWF和HDACl蛋白及其mRNA在BGC-823細(xì)胞表達(dá)水平的變化。 (2)分別單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用vWF抗體(vWF

2、Ab)和HDACl抗體(HDACl Ab)處理細(xì)胞，采用MTT法、倒置顯微鏡、粘附抗體抑制實(shí)驗(yàn)及Boyden小室法檢測(cè)vWF和HDACl對(duì)BGC-823細(xì)胞增殖、形態(tài)、粘附、侵襲和遷移能力的影響。 結(jié)果：(1)BGC-823細(xì)胞能夠表達(dá)vWF和HDACl蛋白及其mRNA；經(jīng)HDAClAb處理后，細(xì)胞中vWF mRNA相對(duì)含量由處理前的0.2134增加到0.3214，vWF蛋白表達(dá)增強(qiáng)；經(jīng)vWFAb處理后，細(xì)胞中HDACl mRN

3、A和蛋白的表達(dá)均無(wú)明顯變化。 (2)MTT法檢測(cè)顯示vWF Ab和HDACl Ab單獨(dú)及聯(lián)合作用均對(duì)BGC-823細(xì)胞增殖有抑制作用，隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，抗體濃度增大，增殖抑制率增加，表明增殖抑制作用呈時(shí)效-量效關(guān)系，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (3)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察vWF Ab和HDACl Ab單獨(dú)及聯(lián)合作用均對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，細(xì)胞形態(tài)改變，部分貼壁細(xì)胞收縮變圓、漂??；細(xì)胞數(shù)目明顯減少，與對(duì)照組

4、比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (4)粘附抗體抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示vWF Ab處理組胃癌細(xì)胞BGC-823的粘附率較未處理組明顯下降(P<0.01)；HDACl Ab處理組細(xì)胞粘附率與對(duì)照組比較無(wú)明顯變化；Ⅳ型膠原高濃度組較低濃度組細(xì)胞粘附率增大(P<0.01)。 (5)Boyden小室侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示vWF Ab處理組細(xì)胞侵襲穿膜細(xì)胞數(shù)為54.86±9.94，與空白對(duì)照組85.86±25.02相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

5、P<0.01)； HDAClAb處理組為85.80±7.42、聯(lián)合作用組為83.60±6.50，分別與對(duì)照組比較，侵襲穿膜細(xì)胞數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 (6)Boyden小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示vWF Ab處理組細(xì)胞遷移穿膜細(xì)胞數(shù)為60.474±16.20，與空白對(duì)照組105.27±2.12相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；HDAClAb處理組為99.26±10.4、聯(lián)合作用組為99.0±6.91，分別與對(duì)照組

6、比較，遷移穿膜細(xì)胞數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論： (1)人胃癌細(xì)胞BGC-823能夠表達(dá)vWF和HDACl蛋白及其mRNA；HDACl可調(diào)節(jié)vWF的表達(dá)。 (2)vWF和HDACl在體外能夠影響胃癌細(xì)胞BGC-823的增殖，并呈時(shí)間、劑量依賴性。兩者在體外能誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)改變。 (3)vWF在體外能夠促進(jìn)BGC-823細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附；且細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附呈時(shí)間依賴性；提示vWF在BGC-