BEHP染毒小鼠2型糖尿病模型的建立與初步研究.pdf

1、糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一種多病因的慢性代謝紊亂疾病，是由于胰島素分泌減少、功能減退或者胰島素抵抗相關(guān)等因素導(dǎo)致高血糖含量，從而引起糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂以及逐步造成其他器官的損傷和一系列功能障礙。糖尿病是當(dāng)今世界最常見的慢性病癥之一，被列為繼心血管疾病和腫瘤之后的第三大頑固疾病。目前中國已成為世界上糖尿病患者最多的國家，其中2型糖尿病的發(fā)病率最高。DEHP作為應(yīng)用廣泛的環(huán)境污染物，其毒性研究已為人們所重視

2、。美國Stahlhut的流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病與鄰苯二甲酸酯類化合物之間存在著相關(guān)性，但目前還沒有相應(yīng)的動物模型來支持這一假說，同時鄰苯二甲酸酯類化合物對糖尿病影響的機(jī)制通路也尚未明確。因此本實(shí)驗(yàn)通過采用DEHP染毒暴露的Balb/C小鼠經(jīng)高脂高糖飼養(yǎng)后注射STZ來誘導(dǎo)制備2型糖尿病模型，以達(dá)到研究DEHP與糖尿病內(nèi)在聯(lián)系的目的，為進(jìn)一步研究受環(huán)境因素影響的糖尿病發(fā)病機(jī)制提供基礎(chǔ)的分子學(xué)理論。
　　 1．DEHP聯(lián)合效應(yīng)誘導(dǎo)的

3、糖尿病模型的建立小鼠買回后適應(yīng)性飼養(yǎng)3—4天后隨機(jī)分組，單數(shù)組喂養(yǎng)高脂高糖飼料，雙數(shù)組喂養(yǎng)普通飼料(包括0組)，每天O組和1組進(jìn)行吐溫—80+生理鹽水灌胃、2組和3組進(jìn)行10mg/kg/d DEHP灌胃染毒、4組和5組進(jìn)行50mg/kg/d DEHP灌胃染毒、6組和7組進(jìn)行250mg/kg/d DEHP灌胃染毒。染毒持續(xù)3周后，禁食12h，尾部取血測空腹血糖，喂食，再次禁食12h，第二天按體重腹腔注射100mg/kg STZ溶液(所有對

4、照組注射檸檬酸緩沖液)。1周后測血糖值，3天后再次禁食12h，第二天注射80mg/kg STZ溶液，1周后測血糖，出現(xiàn)糖尿病小鼠，不再注射STZ，恢復(fù)灌胃，再持續(xù)3周，血糖值基本穩(wěn)定后，處死，測定肝臟氧化損傷指標(biāo)、血清胰島素含量以及胰腺和腎臟組織切片等。
　　 2．DEHP對糖尿病發(fā)生的直接和間接影響本實(shí)驗(yàn)通過DEHP單獨(dú)暴露組和DEHP染毒、高脂飼養(yǎng)、鏈尿佐菌素注射聯(lián)合誘導(dǎo)的糖尿病小鼠模型組的建立，對DEHP在DEHP聯(lián)合作用

5、誘導(dǎo)的糖尿病發(fā)病過程中所產(chǎn)生的直接和間接作用進(jìn)行了對照研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示DEHP作為一種環(huán)境因子，確實(shí)能對糖尿病的發(fā)生產(chǎn)生影響。結(jié)合所測的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，可以進(jìn)行推斷，單獨(dú)的DEHP灌胃染毒可以對小鼠機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的氧化損傷以及各種臟器毒性效應(yīng)，這些刺激使得單獨(dú)灌胃組的數(shù)據(jù)與空白對照組對比呈現(xiàn)出一定的差異，并且這種差異與DEHP濃度存在著劑量相關(guān)性。但是DEHP的毒性作用不能直接誘導(dǎo)糖尿病的發(fā)生，而在聯(lián)合作用誘導(dǎo)的建模組，DEHP染毒暴露發(fā)揮了

6、明顯的效應(yīng)，這從建模組小鼠的糖尿病癥狀的出現(xiàn)情況以及胰島素含量的測定結(jié)果可以得到證實(shí)。此外氧化損傷指標(biāo)的結(jié)果也反映出DEHP的輔助作用，同時還可以進(jìn)一步推測DEHP對糖尿病的影響機(jī)制并不是完全直接通過其氧化損傷作用介導(dǎo)，應(yīng)該還有其他諸如生殖毒性(睪酮影響)、促炎癥作用等效應(yīng)通路使得糖尿病的發(fā)生易化。但這一推論還需要通過對聯(lián)合效應(yīng)建模組和單獨(dú)DEHP灌胃染毒組小鼠體內(nèi)各種與胰島素抗性以及胰島素作用通路相關(guān)的細(xì)胞因子以及糖尿病易感基因的測定