BEHP染毒小鼠2型糖尿病模型的建立與初步研究.pdf

1、糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一種多病因的慢性代謝紊亂疾病，是由于胰島素分泌減少、功能減退或者胰島素抵抗相關等因素導致高血糖含量，從而引起糖、脂肪和蛋白質代謝紊亂以及逐步造成其他器官的損傷和一系列功能障礙。糖尿病是當今世界最常見的慢性病癥之一，被列為繼心血管疾病和腫瘤之后的第三大頑固疾病。目前中國已成為世界上糖尿病患者最多的國家，其中2型糖尿病的發(fā)病率最高。DEHP作為應用廣泛的環(huán)境污染物，其毒性研究已為人們所重視

2、。美國Stahlhut的流行病學研究發(fā)現，糖尿病與鄰苯二甲酸酯類化合物之間存在著相關性，但目前還沒有相應的動物模型來支持這一假說，同時鄰苯二甲酸酯類化合物對糖尿病影響的機制通路也尚未明確。因此本實驗通過采用DEHP染毒暴露的Balb/C小鼠經高脂高糖飼養(yǎng)后注射STZ來誘導制備2型糖尿病模型，以達到研究DEHP與糖尿病內在聯系的目的，為進一步研究受環(huán)境因素影響的糖尿病發(fā)病機制提供基礎的分子學理論。
　　 1．DEHP聯合效應誘導的

3、糖尿病模型的建立小鼠買回后適應性飼養(yǎng)3—4天后隨機分組，單數組喂養(yǎng)高脂高糖飼料，雙數組喂養(yǎng)普通飼料(包括0組)，每天O組和1組進行吐溫—80+生理鹽水灌胃、2組和3組進行10mg/kg/d DEHP灌胃染毒、4組和5組進行50mg/kg/d DEHP灌胃染毒、6組和7組進行250mg/kg/d DEHP灌胃染毒。染毒持續(xù)3周后，禁食12h，尾部取血測空腹血糖，喂食，再次禁食12h，第二天按體重腹腔注射100mg/kg STZ溶液(所有對

4、照組注射檸檬酸緩沖液)。1周后測血糖值，3天后再次禁食12h，第二天注射80mg/kg STZ溶液，1周后測血糖，出現糖尿病小鼠，不再注射STZ，恢復灌胃，再持續(xù)3周，血糖值基本穩(wěn)定后，處死，測定肝臟氧化損傷指標、血清胰島素含量以及胰腺和腎臟組織切片等。
　　 2．DEHP對糖尿病發(fā)生的直接和間接影響本實驗通過DEHP單獨暴露組和DEHP染毒、高脂飼養(yǎng)、鏈尿佐菌素注射聯合誘導的糖尿病小鼠模型組的建立，對DEHP在DEHP聯合作用

5、誘導的糖尿病發(fā)病過程中所產生的直接和間接作用進行了對照研究。實驗結果顯示DEHP作為一種環(huán)境因子，確實能對糖尿病的發(fā)生產生影響。結合所測的實驗指標，可以進行推斷，單獨的DEHP灌胃染毒可以對小鼠機體產生相應的氧化損傷以及各種臟器毒性效應，這些刺激使得單獨灌胃組的數據與空白對照組對比呈現出一定的差異，并且這種差異與DEHP濃度存在著劑量相關性。但是DEHP的毒性作用不能直接誘導糖尿病的發(fā)生，而在聯合作用誘導的建模組，DEHP染毒暴露發(fā)揮了

6、明顯的效應，這從建模組小鼠的糖尿病癥狀的出現情況以及胰島素含量的測定結果可以得到證實。此外氧化損傷指標的結果也反映出DEHP的輔助作用，同時還可以進一步推測DEHP對糖尿病的影響機制并不是完全直接通過其氧化損傷作用介導，應該還有其他諸如生殖毒性(睪酮影響)、促炎癥作用等效應通路使得糖尿病的發(fā)生易化。但這一推論還需要通過對聯合效應建模組和單獨DEHP灌胃染毒組小鼠體內各種與胰島素抗性以及胰島素作用通路相關的細胞因子以及糖尿病易感基因的測定