瓊枝麒麟菜多糖對輻射損傷小鼠免疫和造血功能的影響.pdf

1、目的：本課題以海南生產(chǎn)的瓊枝麒麟菜為原料，研究瓊枝麒麟菜多糖(Eucheumagelatinaepolysaccharide，EGP)的提取，并深入研究其對輻射損傷小鼠免疫和造血功能的影響，探討其在生物醫(yī)藥領域應用的可能性，為瓊枝麒麟菜資源的進一步開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。 方法：(1)昆明小鼠50只，按照隨機分組原則，分為五組，A為正常對照組、B組為照射對照組、C為100mg/kgEGP加照射組、D為200mg/kgEGP加照射組

2、、E為400mg/kgEGP加照射組。(2)熱水浸提法提取瓊枝麒麟菜多糖。(3)紫外分光光度法，紅外光譜、等離子體發(fā)射光譜和分光光度比色法分別分析瓊枝麒麟菜多糖的純度、分子構(gòu)型、微量元素和單糖組分。(4)稱重法檢測小鼠胸腺和脾指數(shù)。(5)比色法和3H-TdR摻入法檢測巨噬細胞吞飲功能、NO和IL-1分泌功能。(6)形態(tài)學方法檢測NK細胞。(7)3H-TdR和3H-TyR摻入法測定小鼠胸腺細胞、脾細胞DNA合成及蛋白質(zhì)合成能力。(8)脾淋

3、巴細胞轉(zhuǎn)化及脾混合淋巴細胞反應，檢測小鼠T、B淋巴細胞免疫功能。(9)流式細胞儀檢測外周血CD4和CD8和骨髓細胞周期。(10)溶血素生成試驗觀察體液免疫。(11)ELISA檢測小鼠血清IL-2、TNF-α和IFN-γ。(12)RT-PCR檢測脾細胞IFN-γmRNA表達。(13)Westernblot檢測脾細胞IFN-γ蛋白表達。(14)骨髓有核細胞計數(shù)及DNA含量測定觀察骨髓輻射損傷。(15)內(nèi)源性脾結(jié)節(jié)法觀察多能干細胞功能。(16

4、)體外CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Meg和CFU-Mix集落半固體培養(yǎng)法觀察造血祖細胞定向分化功能 結(jié)果：(1)得到黃色蓬松纖維狀瓊枝麒麟菜多糖，產(chǎn)率為20％，總硫酸基含量為11.92％，總糖含量83％，主要由70.13％的D-半乳糖和17.95％的3,6-內(nèi)醚半乳糖組成。紫外掃描結(jié)果表明多糖幾乎不含核酸和蛋白質(zhì)，紅外光譜顯示EGP主要為K-卡拉膠并顯示多糖分子結(jié)構(gòu)。(2)200mg/kg和400mg/kgEG

5、P小鼠胸腺和脾指數(shù)明顯高于正常對照組。(3)照射對照組小鼠免疫指標明顯低于正常對照組，200mg/kg和400mg/kgEGP能顯著提高輻射損傷小鼠的免疫功能。(4)照射對照組小鼠巨噬細胞分泌IL-1、血清IL-2、TNF-α和IFN-γ濃度明顯低于正常對照組，200mg/kg和400mg/kgEGP能顯著提高輻射損傷小鼠上述細胞因子的分泌。(5)照射對照組小鼠脾細胞IFN-γmRNA和IFN-γ蛋白表達水平明顯低于正常對照組，100m