小腸RNA對(duì)輻射損傷后腸道免疫的影響.pdf

1、本課題擬探討小腸RNA對(duì)受60Coγ線照射小鼠腸道損傷修復(fù)過(guò)程中腸道免疫的變化及其機(jī)制，為腸道損傷的治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，提高急性放射病治療水平。 研究方法：BALB/c小鼠于實(shí)驗(yàn)前一天按完全隨機(jī)法分為正常對(duì)照組、照射對(duì)照組和小腸RNA組，設(shè)照后6h、1d、3d、5d共4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，用60Coγ線進(jìn)行腹部一次照射，劑量率為(228.03～249.12)cGy/min，劑量為1150cGy。于照后1～3h采用局部腸腔擴(kuò)張注入法給小

2、鼠空腸腸腔內(nèi)注入小腸RNA，照射對(duì)照組小鼠只在腸腔內(nèi)注入等量無(wú)菌生理鹽水，于照后不同時(shí)間點(diǎn)麻醉解剖小鼠，觀察以下指標(biāo)： (1)光鏡觀察小鼠空腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化；(2)電鏡(透射電鏡和掃描電鏡)觀察小鼠空腸超微結(jié)構(gòu)的變化；(3)孚爾根染色法計(jì)數(shù)小鼠空腸腸腺存活率的變化；(4)厭氧細(xì)菌培養(yǎng)法觀察小鼠腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌移位的變化；(5)采用基質(zhì)顯色法檢測(cè)小鼠腹主動(dòng)脈血中內(nèi)毒素含量的變化；(6)以免疫濁度檢測(cè)法檢測(cè)小鼠腸黏液中免疫球蛋白的含

3、量的變化；(7)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定小鼠腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞周期的變化；(8)采用免疫組化方法檢測(cè)小鼠腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞P53蛋白表達(dá)的變化；(9)TUNEL法檢測(cè)小鼠腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞凋亡率的變化；(10)化學(xué)發(fā)光分析法檢測(cè)小鼠腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的變化。 研究結(jié)果： 1.非特異性免疫功能的變化①組織形態(tài)的變化：照后1d，照射對(duì)照組腸腺存活率為60.6％，電鏡見(jiàn)除腸腺上皮細(xì)胞有輕度空泡化外，其它細(xì)胞器沒(méi)有顯著

4、變化。至照后3d，電鏡下腸腺上皮細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞變性，核膜腔擴(kuò)張，異染色質(zhì)增多，核仁濃縮，腸腺存活率降低了65.8％(P＜0.01)，光鏡下可見(jiàn)較少殘存腸腺，腸腺內(nèi)細(xì)胞數(shù)目少，空腸絨毛斷裂、粘連，間質(zhì)腫脹明顯。照后5d，腸腺存活率有所回升，但細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)恢復(fù)較慢，電鏡示腸腺上皮細(xì)胞微絨毛腫脹，排列紊亂，線粒體空泡化，嵴腫脹；注入小腸RNA后，小鼠空腸的腸腺存活率在各時(shí)間點(diǎn)均比照射對(duì)照組升高近20％(P＜0.01)。電鏡示照后1d腸腺上皮細(xì)胞

5、微絨毛整齊，細(xì)胞連接完整，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)基本正常。照后3～5d也僅出現(xiàn)線粒體輕度腫脹和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張，絨毛排列較照射對(duì)照組整齊、規(guī)則，未見(jiàn)明顯縮短，較粗大，形狀不一致，絨毛萎縮、塌陷少見(jiàn)；②血中內(nèi)毒素含量的變化：照射對(duì)照組在照后1d即顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，照后3d和5d持續(xù)升高。小腸RNA組小鼠血漿內(nèi)毒素含量在照后3d和5d明顯低于照射對(duì)照組(P＜0.01)；③腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌移位率的變化：照射對(duì)照組隨照后時(shí)間的延長(zhǎng)持續(xù)升

6、高(P＜0.01)，而小腸RNA組腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌移位率于照后5d明顯低于照射對(duì)照組(P＜0.05)。 2.腸黏液中免疫球蛋白含量的變化照后1、3、5d照射對(duì)照組和小腸RNA組小鼠腸黏液中免疫球蛋白sIgA和sIgG含量均顯著下降(P＜0.01)，且小腸RNA組明顯高于照射對(duì)照組(P＜0.01)；在照后3d處于最低值時(shí)，小腸RNA組sIgG含量與照射對(duì)照組無(wú)顯著差異，至照后5d小腸RNA組sIgG含量有所回升(P＜0.01)。

7、 3.淋巴細(xì)胞生物學(xué)特性的變化①腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞G1期細(xì)胞百分率在照后6h開(kāi)始增高，照后1d升到最高(P＜0.01)，S期細(xì)胞百分率呈持續(xù)性降低，至照后3d降至最低(P＜0.01)，G2期細(xì)胞百分率照后3d明顯升高(P＜0.01)。小腸RNA作用后，與照射對(duì)照組相比，腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞G1期細(xì)胞百分率予照后3d顯著降低(P＜0.01)，G2期細(xì)胞百分率也降低，S期細(xì)胞百分率至照后3d顯著升高(P＜0.01)；②腸系膜淋巴結(jié)淋

8、巴細(xì)胞凋亡率于照后6h明顯升高，照后1d升到最高(P＜0.01)，照后3d有所下降。小腸RNA作用后，與照射對(duì)照組相比，凋亡率顯著降低(P＜0.01)；③腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞P53蛋白的表達(dá)在照后6h顯著升高，照后1d升到最高(P＜＜0.01)，照后3d有所下降。小腸RNA作用后，與照射對(duì)照組相比，P53蛋白的表達(dá)顯著降低(P＜0.01)；④小腸RNA的抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用：照射后，照射對(duì)照組腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度呈持續(xù)性增高，照

9、后3d升至最高(P＜0.01)。小腸RNA組腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度從照后6h起一直低于照射對(duì)照組，至照后3d明顯低于照射對(duì)照組(P＜0.01)。 研究結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)條件下：①電離輻射可引起小鼠腸道非特異性免疫、體液免疫功能的降低，以及與細(xì)胞免疫相關(guān)的淋巴細(xì)胞生物學(xué)特性的改變，且具有一定的時(shí)程特性；②小腸RNA作用后，可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期、減少自由基生成、調(diào)控P53蛋白表達(dá)降低細(xì)胞凋亡來(lái)增強(qiáng)sIgA、sIgG的分泌，促進(jìn)腸道