蝎毒多肽對輻射損傷小鼠造血功能恢復(fù)的研究.pdf

1、背景和目的： 放射治療是臨床上腫瘤治療的重要手段之一。放療在清除殺傷腫瘤細(xì)胞的同時，對射線極為敏感的造血系統(tǒng)也受到嚴(yán)重?fù)p傷，引發(fā)一系列造血和免疫系統(tǒng)功能障礙而降低患者的生活質(zhì)量并增加治療難度。如何在利用射線殺傷腫瘤細(xì)胞的同時保護(hù)機(jī)體正常的造血功能是目前岌待解決的問題之一。研究證明，由東亞鉗蝎蝎毒中分離出的蝎毒多肽(SVP)對多種腫瘤細(xì)胞有明顯抑制作用，可以增強(qiáng)放療對肝癌H<,22>荷瘤小鼠的抑瘤效果，還能夠加快清除照射后產(chǎn)生的自

2、由基，抑制輻射引發(fā)的脂質(zhì)過氧化作用，具有一定的抗輻射損傷作用。前期實(shí)驗(yàn)提示SVP能促進(jìn)放、化療致骨髓抑制小鼠造血和免疫細(xì)胞數(shù)量的恢復(fù)，可能機(jī)制是通過其刺激造血生長因子的分泌而得以實(shí)現(xiàn)。本研究觀察了蝎毒多肽組分對輻射后早期造血細(xì)胞生長狀態(tài)的影響及其對放射致輻射損傷小鼠骨髓造血干/祖細(xì)胞的作用，并探討了蝎毒多肽發(fā)揮作用的可能機(jī)制及信號途徑。 材料和方法： 1．蝎毒多肽組分對輻射后早期造血細(xì)胞增殖作用的研究：用MTT法篩選SV

3、P對輻射后早期造血細(xì)胞(K562細(xì)胞)有促增殖作用的組分，并確定其有效濃度，作為體外實(shí)驗(yàn)中SVP的使用濃度； 2．SVP對輻射損傷小鼠骨髓造血干/祖細(xì)胞集落形成的影響。選用雄性BALB/c小鼠，分體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。 體外實(shí)驗(yàn)：將小鼠用6.0 Gy X射線一次性全身照射，于照射后第5、10、15和30天取其骨髓細(xì)胞，用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)骨髓混合集落(CFU-Mix)，分別加入SVPⅣ、SVPⅤ、細(xì)胞因子、SVPⅣ

4、+細(xì)胞因子、SVPⅤ+細(xì)胞因子，觀察在體外對照射后不同時間SVPⅣ、SVPⅤ以及SVPⅣ和SVPⅤ與細(xì)胞因子聯(lián)合應(yīng)用對骨髓細(xì)胞CFU-Mix生成的影響。 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：小鼠被隨機(jī)分為三組：生理鹽水對照組、SVPⅣ組(0.4mg/kg，半數(shù)致死量的1/10)和SVPV組(0.2mg/kg，半數(shù)致死量的1/20)。各組連續(xù)10天腹腔注射生理鹽水及蝎毒多肽，并在給藥后第4天給予亞致死量X射線一次性全身照射，總劑量為6.0 Gy。內(nèi)源性脾結(jié)

5、節(jié)法觀察照射后第10天脾集落形成單位(CFU-S)的變化；用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)骨髓細(xì)胞CFU-Mix，觀察SVP對照射后不同時間CFU-Mix生成的影響。 3．SVP對輻射損傷小鼠骨髓細(xì)胞因子受體表達(dá)的影響：小鼠被隨機(jī)分為三組：生理鹽水對照組、SVPⅣ組(0.4mg/kg)和SVPⅤ組(0.2mg/kg)。各組連續(xù)10天腹腔注射生理鹽水及蝎毒多肽，并在給藥后第4天給予亞致死量X射線一次性全身照射，總劑量為6.0 Gy。在

6、照射后第5、10、15、30天取小鼠胸骨，采用免疫組化、組織芯片等方法檢測胸骨骨髓細(xì)胞中C-KIT和IL-6Ra表達(dá)情況。 4．SVP組分對磷酸化STAT3蛋白表達(dá)的影響：取正常BALB/c小鼠骨髓細(xì)胞，體外分別加入SVPⅣ和SVPⅤ，作用不同時間后提取細(xì)胞內(nèi)總蛋白，用Western blotting方法檢測JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中磷酸化STAT3蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)論： 1．SVPⅣ可以促進(jìn)照射后造血早期

7、細(xì)胞(K562細(xì)胞)增殖，其中30mg/L濃度的作用最為顯著。 2．SVPⅣ和SVP Ⅴ在體外均能夠促進(jìn)小鼠骨髓混合集落CFU-Mix的形成，二者與細(xì)胞因子聯(lián)合應(yīng)用可以協(xié)同促進(jìn)CFU-Mix的生長，其中SVPⅣ的作用效果更加明顯。體內(nèi)注射SVPⅣ可以顯著促進(jìn)小鼠脾集落形成單位(CFU-S)的形成，SVPⅣ和SVPⅤ在照射后早期即發(fā)揮促進(jìn)CFU-Mix集落生長的作用。 3．SVPⅣ和SVPⅤ對正常小鼠骨髓細(xì)胞磷酸化STAT