人成牙本質(zhì)細(xì)胞L型鈣離子通道α1亞基D亞型特異性基因的克隆研究.pdf

1、牙本質(zhì)是構(gòu)成牙齒的主體，在生理情況下只有礦化過(guò)程，不存在類似于骨組織的吸收和改建過(guò)程，牙本質(zhì)的形成細(xì)胞——成牙本質(zhì)細(xì)胞具有終身形成牙本質(zhì)的能力，也是牙本質(zhì)發(fā)生損傷，齲損時(shí)的修復(fù)細(xì)胞。因此，以成牙本質(zhì)細(xì)胞為研究對(duì)象，可以直觀的反映牙本質(zhì)的形成和修復(fù)機(jī)制，并在一定程度上可以反映人類礦化細(xì)胞在組織礦化過(guò)程中的作用機(jī)制。
　　成牙本質(zhì)細(xì)胞是位于牙髓組織外周的高柱狀細(xì)胞，來(lái)源于外胚間充質(zhì)細(xì)胞，在牙本質(zhì)礦化過(guò)程中起重要的作用。研究表明，許多分

2、子參與了牙本質(zhì)礦化的過(guò)程，目前已知有L型鈣離子通道、鈣離子ATP酶、鈉鈣離子交換泵和鈣結(jié)合蛋白等，其中L型鈣離子通道起著主要作用。
　　L型鈣離子通道是由α1、α2、β、γ、δ五種亞基構(gòu)成的高分子糖蛋白復(fù)合體，α1亞基是L型鈣離子通道主要的功能單位，可獨(dú)立表達(dá)出具有功能活性的鈣離子通道，α1亞基有α1C、α1D、α1S三種基因型。研究發(fā)現(xiàn)在小鼠成牙本質(zhì)細(xì)胞膜上L型鈣離子通道α1亞基D亞型的表達(dá)較高，它可能在牙本質(zhì)礦化過(guò)程中對(duì)鈣離子

3、的轉(zhuǎn)運(yùn)起主要作用。課題組曾利用永生化成牙本質(zhì)細(xì)胞系進(jìn)行了人成牙本質(zhì)樣細(xì)胞L型鈣離子通道α1亞基D亞型的特異性基因片段克隆研究，而國(guó)外對(duì)人成牙本質(zhì)細(xì)胞L型鈣離子通道α1亞基的基因水平的研究還未見(jiàn)報(bào)道。
　　成牙本質(zhì)細(xì)胞與牙本質(zhì)緊密相連，細(xì)胞呈單層排列于牙髓組織的表面，在牙髓中主要為其胞體結(jié)構(gòu)，有胞漿突起伸入牙本質(zhì)小管中，并且細(xì)胞數(shù)量較少，加之成牙本質(zhì)細(xì)胞是一種高度分化的終末細(xì)胞，無(wú)論在體內(nèi)還是體外正常培養(yǎng)環(huán)境中都不可能繼續(xù)分化、增殖

4、，因此采用常規(guī)方法難以獲得大量純化的成牙本質(zhì)細(xì)胞。課題組采用聯(lián)合酶消化法直接由新鮮離體牙中成功的分離出成牙本質(zhì)細(xì)胞。直接由離體牙分離的成牙本質(zhì)細(xì)胞保留了原有細(xì)胞的特性，因此是比較理想的研究成牙本質(zhì)細(xì)胞性能的細(xì)胞來(lái)源，把它作為研究對(duì)象，將更具有科學(xué)性。
　　本研究采用聯(lián)合酶消化法從新鮮人離體牙中分離出完整的人成牙本質(zhì)細(xì)胞，由細(xì)胞中克隆出L型鈣離子通道α1亞基D亞型的特異性基因片段，并對(duì)其進(jìn)行測(cè)序鑒定，經(jīng)與已登錄的人L型鈣離子通道α1