人成牙本質(zhì)細胞L型鈣離子通道α1亞基D亞型特異性基因的克隆研究.pdf

1、牙本質(zhì)是構成牙齒的主體，在生理情況下只有礦化過程，不存在類似于骨組織的吸收和改建過程，牙本質(zhì)的形成細胞——成牙本質(zhì)細胞具有終身形成牙本質(zhì)的能力，也是牙本質(zhì)發(fā)生損傷，齲損時的修復細胞。因此，以成牙本質(zhì)細胞為研究對象，可以直觀的反映牙本質(zhì)的形成和修復機制，并在一定程度上可以反映人類礦化細胞在組織礦化過程中的作用機制。
　　成牙本質(zhì)細胞是位于牙髓組織外周的高柱狀細胞，來源于外胚間充質(zhì)細胞，在牙本質(zhì)礦化過程中起重要的作用。研究表明，許多分

2、子參與了牙本質(zhì)礦化的過程，目前已知有L型鈣離子通道、鈣離子ATP酶、鈉鈣離子交換泵和鈣結合蛋白等，其中L型鈣離子通道起著主要作用。
　　L型鈣離子通道是由α1、α2、β、γ、δ五種亞基構成的高分子糖蛋白復合體，α1亞基是L型鈣離子通道主要的功能單位，可獨立表達出具有功能活性的鈣離子通道，α1亞基有α1C、α1D、α1S三種基因型。研究發(fā)現(xiàn)在小鼠成牙本質(zhì)細胞膜上L型鈣離子通道α1亞基D亞型的表達較高，它可能在牙本質(zhì)礦化過程中對鈣離子

3、的轉運起主要作用。課題組曾利用永生化成牙本質(zhì)細胞系進行了人成牙本質(zhì)樣細胞L型鈣離子通道α1亞基D亞型的特異性基因片段克隆研究，而國外對人成牙本質(zhì)細胞L型鈣離子通道α1亞基的基因水平的研究還未見報道。
　　成牙本質(zhì)細胞與牙本質(zhì)緊密相連，細胞呈單層排列于牙髓組織的表面，在牙髓中主要為其胞體結構，有胞漿突起伸入牙本質(zhì)小管中，并且細胞數(shù)量較少，加之成牙本質(zhì)細胞是一種高度分化的終末細胞，無論在體內(nèi)還是體外正常培養(yǎng)環(huán)境中都不可能繼續(xù)分化、增殖

4、，因此采用常規(guī)方法難以獲得大量純化的成牙本質(zhì)細胞。課題組采用聯(lián)合酶消化法直接由新鮮離體牙中成功的分離出成牙本質(zhì)細胞。直接由離體牙分離的成牙本質(zhì)細胞保留了原有細胞的特性，因此是比較理想的研究成牙本質(zhì)細胞性能的細胞來源，把它作為研究對象，將更具有科學性。
　　本研究采用聯(lián)合酶消化法從新鮮人離體牙中分離出完整的人成牙本質(zhì)細胞，由細胞中克隆出L型鈣離子通道α1亞基D亞型的特異性基因片段，并對其進行測序鑒定，經(jīng)與已登錄的人L型鈣離子通道α1