半邊蓮生物堿和山梗菜堿對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景與目的：動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的發(fā)生機(jī)制存在多種假說,目前占主導(dǎo)地位的“損傷—反應(yīng)假說”和“炎癥說”認(rèn)為,內(nèi)皮細(xì)胞損傷、中膜平滑肌細(xì)胞遷移和增殖是AS發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。內(nèi)皮素(ET)是血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞分泌的血管活性收縮肽,在AS的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。已有研究明確,ET能夠刺激平滑肌細(xì)胞增殖,然而,內(nèi)膜損傷導(dǎo)致生成增多的ET反過來對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有何損傷作用,目前尚不清楚,因此,本研究首先采用ET-1誘導(dǎo)損傷離體內(nèi)皮細(xì)胞,探討

2、ET-1對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。 由于蛇毒和ET具有共同的祖基因,蛇毒和ET-1分子結(jié)構(gòu)極為相似,而且具有相似的生物學(xué)效應(yīng)。1993年,張繼峰等發(fā)現(xiàn)半邊蓮對(duì)ET-1、NE引起的保留內(nèi)皮和去內(nèi)皮血管環(huán)收縮均有劑量依賴的緩解作用。我室杜艷芝等曾對(duì)高脂血癥大鼠灌服半邊蓮,定量分析其對(duì)動(dòng)脈內(nèi)皮的保護(hù)作用,發(fā)現(xiàn)半邊蓮生物堿(LCLAs)可使高脂血癥大鼠內(nèi)皮細(xì)胞的ET合成及釋放減少,eNOS合成增加,減輕高脂血癥對(duì)血管內(nèi)皮的持續(xù)損傷。為了進(jìn)一步

3、探討LCLAs對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用機(jī)制,并進(jìn)一步明確其有效成分,我們提取LCLAs,并同時(shí)應(yīng)用其主要單體山梗菜堿,觀察其對(duì)ET-1誘導(dǎo)損傷的人血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用,以為半邊蓮及其有效成分應(yīng)用于臨床治療心腦血管疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分：內(nèi)皮素對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響 方法： (1)CCK(細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒)法確定建立細(xì)胞損傷模型的ET-1劑量：培養(yǎng)人血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,制成單細(xì)胞懸液,以4×10~1/ml的密