動(dòng)脈粥樣硬化兔血管平滑肌鈣激活鉀通道活性及其對(duì)硝普鈉反應(yīng)性變化的研究.pdf

1、目的：動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是許多心腦血管疾病共同的病理基礎(chǔ)，一種復(fù)雜的血管壁病變。AS形成過(guò)程中，由于內(nèi)皮功能受損，內(nèi)皮源性血管舒張因子（EDRF）合成和釋放減少，內(nèi)皮源性血管收縮因子（EDCF）活性增強(qiáng)，血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMC）對(duì)縮血管物質(zhì)的反應(yīng)性增加，血管緊張性增加。VSMC 的K+通道通過(guò)影響膜電位而參與血管緊張性的調(diào)節(jié)。在VSMC上存在4

2、種類型K+通道，其中以鈣激活鉀通道（Ca2+-activated K+ channel，Kca）尤其是大電導(dǎo)鈣激活鉀通道（BKCa）在VSMC上分布最多，密度最大，是運(yùn)載外向電流的優(yōu)勢(shì)通道。AS時(shí)，由于血管緊張性增加以及受VSMC增殖的影響，VSMC BKCa活性可能發(fā)生某些變化，但目前研究報(bào)道極少。硝普鈉（sodium nitroprusside，SNP）是一種強(qiáng)大的硝基擴(kuò)血管藥，目前認(rèn)為其擴(kuò)血管機(jī)制是通過(guò)分解產(chǎn)生NO，然后再經(jīng)Kca

3、途徑和非Kca途徑擴(kuò)張血管。而SNP是否可以不通過(guò)分解產(chǎn)生NO，直接激活BKCa而擴(kuò)血管，以及AS時(shí)VSMC BKCa對(duì)其反應(yīng)性是否發(fā)生了改變，目前尚未見(jiàn)研究報(bào)道。因此本研究有以下兩個(gè)目的：（1）研究AS時(shí)VSMC BKCa活性是否發(fā)生了變化，從而進(jìn)一步探討其在AS時(shí)的病理生理意義。（2）研究SNP是否可以直接激活VSMC BKCa以及AS時(shí)VSMC BKCa對(duì)SNP的反應(yīng)性是否發(fā)生變化，以進(jìn)一步探討SNP的擴(kuò)血管機(jī)制，同時(shí)為AS時(shí)更有

4、效地?cái)U(kuò)張血管探索新的途徑。方法：1. 本實(shí)驗(yàn)采用3月齡新西蘭兔20只，雌雄各半，隨機(jī)分成兩組：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組10只。實(shí)驗(yàn)組喂高脂飼料（含0.5％膽固醇+5％豬油+15％蛋黃粉+79.5％普通飼料）以復(fù)制AS模型，對(duì)照組只喂普通飼料，兩組均喂8周。然后以肉眼直接觀察，結(jié)合病理學(xué)光鏡和電鏡檢查兔胸主動(dòng)脈AS病變特點(diǎn)對(duì)復(fù)制的AS模型進(jìn)行鑒定。2. 采用單通道膜片鉗技術(shù)記錄兩組兔胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa活性，以比較分析二者有無(wú)不同。同時(shí)

5、在inside-out patches下研究SNP對(duì)兩組BKCa的直接激活作用，并進(jìn)一步分析其對(duì)SNP的反應(yīng)性差異。結(jié)果：1. 本實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組新西蘭兔的胸主動(dòng)脈內(nèi)膜肉眼可見(jiàn)許多乳白色或奶油色粥樣硬化斑塊、脂質(zhì)條紋或斑點(diǎn)。光鏡下可見(jiàn)動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚，泡沫細(xì)胞形成，平滑肌細(xì)胞增生以及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。電鏡下可見(jiàn)增生的平滑肌細(xì)胞內(nèi)有許多空泡。與對(duì)照組相比半定量法損傷程度分值明顯增加（0.20±0.42VS3.70±0.68，P<0.001,n=1

6、0）。2. AS組BKCa活性變化：在cell-attached patches（膜電位為+40mv）下，AS組和對(duì)照組的平均關(guān)閉時(shí)間（Tc）分別為20.143±12.479ms 和 246.892±205.453ms（P<0.01），開(kāi)放概率（Po）分別為0.2385±0.1157 和 0.0308±0.0182（P<0.001）。在inside-out patches下，二者的Tc為51.917±20.322 msVS 430.77

7、2±192.522ms（P<0.001）， Po為0.1566±0.0677 VS 0.0171±0.0076（P<0.001）。因此，在這兩種膜片下，AS組BKCa 的Tc顯著縮短，Po顯著增加。3. 10-6M的 Ca2+（膜電位+40mv）可使AS組和對(duì)照組BKCa的Po分別增加4.293±1.676倍和25.222±14.580倍（P<0.01）。4. SNP可以顯著增加通道的開(kāi)放事件數(shù)，縮短Tc，增加Po，且具有濃度依賴性。5

8、. 10-6M 的SNP（膜電位+40mv）可分別使AS組和對(duì)照組BKCa的Po增加4.297±1.650倍和18.987±7.407倍（P<0.05）。結(jié)論：1. 實(shí)驗(yàn)組兔胸主動(dòng)脈已形成AS。2. 動(dòng)脈粥樣硬化VSMC BKCa活性顯著增強(qiáng)。3. AS組BKCa對(duì)Ca2+的敏感性降低。4. SNP對(duì)VSMC BKCa有直接激活作用，提示SNP還存在著新的擴(kuò)血管機(jī)制。5. AS組BKCa對(duì)SNP的反應(yīng)性降低,提示應(yīng)根據(jù)AS時(shí)VSMC的分