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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討原鈣粘附蛋白10(Procadherin 10,PCDH10)基因在前列腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)特征與調(diào)控機(jī)制。
方法:采用半定量RT-PCR、熒光定量RT-PCR、蛋白印跡(Western Blotting)、免疫熒光染色法、甲基化特異性PCR(MSP)或亞硫酸鹽基因組測(cè)序(BGS)等方法,檢測(cè)PCDH10在前列腺癌組織或四種細(xì)胞系(22RV1、PC3、DU145和LNCaP)中的表達(dá)特征及啟動(dòng)子甲基化的狀態(tài)。采用DNA
2、甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-雜氮脫氧胞嘧啶核苷(AZA)和組蛋白去乙?；敢种苿┣琶顾谹(TSA)處理前列腺癌細(xì)胞系,以探討DNA甲基化和組蛋白去乙?；瘜?duì)PCDH10基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用。
結(jié)果:PCDH10 mRNA在人子宮、卵巢、甲狀腺、食道、胃、肝、前列腺、睪丸和腎組織中均有表達(dá),在前列腺組織中表達(dá)較高。與正常前列腺組織相比,PCDH10在前列腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)明顯減少或消失,其表達(dá)量與PCDH10啟動(dòng)子甲基化呈負(fù)相關(guān)。四種前列
3、腺癌細(xì)胞系經(jīng)AZA處理后,PCDH10在22RV1、PC3和LNCaP細(xì)胞系中啟動(dòng)子甲基化的密度均顯著降低,其mRNA的表達(dá)明顯升高;TSA處理后,PCDH10 mRNA在LNCaP細(xì)胞系的表達(dá)明顯增加,而在22RV1、PC3和DU145三種細(xì)胞系中的表達(dá)無(wú)顯著差異;將AZA與TSA聯(lián)合使用,結(jié)果顯示,兩者對(duì)PCDH10 mRNA的表達(dá)具有協(xié)同作用。
結(jié)論:PCDH10在前列腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)明顯減少或消失,其下降程度與PCD
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