卵泡刺激素與絕經(jīng)后乳腺癌發(fā)病機(jī)理的初步研究.pdf

1、研究背景：
　　乳腺癌仍然是女性患病率最高的腫瘤，占女性腫瘤死亡病因的第二位。絕經(jīng)后乳腺癌的發(fā)病率在我國(guó)仍然處于各年齡段的高峰期。女性絕經(jīng)后，體內(nèi)激素水平發(fā)生了重大的變化，隨著卵巢的衰竭，雌激素(Estradiol，E2)分泌水平的下降，下丘腦以及垂體失去了E2的負(fù)反饋，將分泌更多的卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)以及黃體生成素(luteinizing Hormone，LH)。女性生命

2、的1/3將在高促性腺激素水平中度過(guò)。
　　抗雌激素以及其受體治療是目前乳腺癌內(nèi)分泌治療的主要手段，但是仍然有許多乳腺癌患者不能從內(nèi)分泌治療中獲益。除雌激素外，研究發(fā)現(xiàn)許多的內(nèi)分泌激素與乳腺癌的發(fā)病以及進(jìn)展相關(guān)，包括泌乳素(Prolactin，PRL)，人絨毛膜促性腺激素（Human Chorionic Gonadotropin，hCG），LH等。這些激素協(xié)同或者直接影響乳腺癌的發(fā)生以及進(jìn)展。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)SH參與了女性絕經(jīng)后

3、疾病的發(fā)生，但是FSH在乳腺癌發(fā)病中的研究尚沒(méi)有詳細(xì)的研究。有研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者血清FSH水平與腫瘤的無(wú)復(fù)發(fā)生存率以及總生存率負(fù)相關(guān)。并且也有研究發(fā)現(xiàn)血清FSH水平與乳腺癌組織的Her-2表達(dá)相關(guān)。
　　FSH通過(guò)其特異性受體（Follicle-stimulating hormone receptor, FSHR）介導(dǎo)細(xì)胞增殖，分化。FSHR一直被認(rèn)為只在特異性組織中表達(dá)，即女性顆粒細(xì)胞以及男性睪丸支持細(xì)胞。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)S

4、HR可以在眾多的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)包括卵巢癌，前列腺癌，子宮內(nèi)膜癌，骨骼中表達(dá)。FSHR參與了這些腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)移。FSHR在骨骼細(xì)胞中表達(dá)被認(rèn)為是絕經(jīng)后女性骨質(zhì)疏松的主要原因，而非是經(jīng)典的雌激素途徑。在最近的研究中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)SHR在許多實(shí)體腫瘤的血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，這些表達(dá)在腫瘤與正常組織交界處。乳腺癌體外細(xì)胞系以及乳腺癌組織是否表達(dá)FSHR，以及FSH能否通過(guò)FSHR促進(jìn)乳腺癌的發(fā)病仍然不明確。
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　選取絕經(jīng)后

5、病人對(duì)研究對(duì)象，研究血清FSH以及LH在女性乳腺癌病人和非腫瘤普通婦科炎癥疾病對(duì)照人群中的差異性;研究血清FSH以及LH水平與絕經(jīng)后乳腺癌細(xì)胞ER，PR，Her-2以及Ki67表達(dá)的相關(guān)性;研究FSH以及LH與乳腺癌臨床分期，分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系;研究FSHR是否在乳腺癌體外細(xì)胞系以及癌組織中表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)研究FSH是否促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移，及其具體的分子機(jī)制;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究FSH是否會(huì)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖。
　　實(shí)驗(yàn)方法

6、:
　　第一部分:通過(guò)收取187名絕經(jīng)后乳腺癌患者的病例資料以及內(nèi)分泌數(shù)據(jù)，收集了同時(shí)期374名非腫瘤普通婦科炎癥疾病的絕經(jīng)后患者的內(nèi)分泌檢查數(shù)據(jù)。非腫瘤人群的構(gòu)成主要為婦科的炎癥性疾病，如陰道炎，宮頸炎等。建立數(shù)據(jù)庫(kù)，統(tǒng)計(jì)分析FSH以及LH在絕經(jīng)后乳腺癌患者與絕經(jīng)后健康人群中的差異。分析FSH以及LH與乳腺癌的ER, PR，Her-2 Ki67的表達(dá)，以及臨床分期，分級(jí)，以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。
　　第二部分:體外實(shí)驗(yàn)研究

7、FSH是否促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移。使用MTT檢測(cè)FSH對(duì)乳腺癌細(xì)胞系Bcap-37，MDA-MB-231的促增殖作用。使用WesternBlot檢測(cè)FSH刺激以上兩株細(xì)胞引起的EGFR，ERK1/2，AKT等關(guān)鍵信號(hào)通路分子的激活改變。使用EGFR，ERK1/2等信號(hào)通路的抑制劑后，研究FSH促進(jìn)增殖的主要作用信號(hào)通路。通過(guò)劃痕試驗(yàn)研究FSH對(duì)Bcap-37，MDA-MB-231細(xì)胞系的遷移能力影響，使用基質(zhì)膠Transwell實(shí)驗(yàn)

8、研究FSH對(duì)以上兩株細(xì)胞的侵襲能力影響，并通過(guò)Western Blot檢測(cè)相應(yīng)的分子機(jī)制。
　　第三部分:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究FSH是否促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞系Bcap-37，MDA-MB-231移植瘤的增殖。通過(guò)對(duì)Balb/c裸鼠去勢(shì)手術(shù)建立絕經(jīng)后的動(dòng)物模型。接種乳腺癌細(xì)胞系Bcap-37，MDA-MB-231到Balb/c裸鼠皮下。實(shí)驗(yàn)分為4組:假手術(shù)組，去勢(shì)對(duì)照組，去勢(shì)后使用GnRha組，去勢(shì)后使用GnRHa然后使用FSH組。假手術(shù)組和去勢(shì)

9、對(duì)照組用于比較去勢(shì)對(duì)腫瘤增殖的影響，GnRHa組使用GnRHa抑制裸鼠體內(nèi)的FSH以及LH分泌，排除垂體分泌激素的影響。GnRHa加用FSH組，在GnRHa之后使用FSH使裸鼠體內(nèi)的FSH達(dá)到100IU/L左右的絕經(jīng)后水平。
　　第四部分:檢測(cè)FSHR在乳腺癌體外細(xì)胞系以及乳腺癌組織中的表達(dá)。使用RT-PCR，以及Reverse-PCR檢測(cè)Bcap-37，MDA-MB-231等乳腺癌細(xì)胞系的FSHR表達(dá)情況。同時(shí)檢測(cè)FSHR在17

10、例乳腺癌臨床樣本中的表達(dá)情況。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　第一部分:
　　a)絕經(jīng)后乳腺癌患者血清FSH，LH比對(duì)照人群高（61.83±1.475 vs.48.13±1.256 IU/L;27.83±0.74 vs.23.88±0.6499 IU/L）。
　　b)絕經(jīng)后乳腺癌患者血清FSH水平與腫瘤Ki67，Her-2表達(dá)正相關(guān);LH水平與Ki67表達(dá)正相關(guān)。
　　c)血清FSH，LH濃度與絕經(jīng)后乳腺癌的腫瘤ER

11、，PR，腫瘤的的臨床分型，分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況沒(méi)有相關(guān)性。
　　第二部分:
　　a) FSH可以促進(jìn)入乳腺癌細(xì)胞系Bcap-37，MDA-MB-231的體外增殖，可以促進(jìn)Bcap-37細(xì)胞的遷移。
　　b) FSH通過(guò)EGFR/ERK1/2通路促進(jìn)Bcap-37，MDA-MB-231細(xì)胞的增殖。
　　第三部分:
　　a)成功構(gòu)建了絕經(jīng)后的Balb/cnu/nu小鼠動(dòng)物模型。
　　b) FSH(≈10

12、0IU/L)可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞系Bcap-37，MDA-MB-231移植瘤的體內(nèi)增殖。
　　第四部分:
　　Bcap-37，MDA-MB-231，MCF-7，T-47D，SK-BR-3，BT-474乳腺癌永生化細(xì)胞系以及17例乳腺癌病人癌組織無(wú)FSHR表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　a)絕經(jīng)后乳腺癌患者血清FSH和LH濃度較絕經(jīng)后對(duì)照人群高;FSH水平與乳腺癌組織的Ki67，Her-2表達(dá)正相關(guān);與乳腺癌的臨床分型，

13、分期，以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不相關(guān)。
　　b) FSH在體外通過(guò)EGFR/ERK1/2促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞系Bcap-37的增殖與轉(zhuǎn)移，以及MDA-MB-231細(xì)胞的增殖。
　　c)FSH(≈100IU/L)可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞Bcap-37，MDA-MB-231裸鼠移植瘤的體內(nèi)增殖。
　　d)乳腺癌細(xì)胞系(Bcap-37，MDA-MB-231，Mcf-7，T-47D，SKBR-3，BT-474)以及乳腺癌組織樣本中不表達(dá)FSHR。<