烏頭堿經(jīng)皮給藥藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)結(jié)合研究.pdf

1、本文主要研究?jī)?nèi)容有以下幾個(gè)方面： 1、采用HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)建立大鼠血漿和微透析樣品中烏頭堿的分析方法。烏頭堿在檢測(cè)要求范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，色譜的專(zhuān)屬性、回收率、精密度等測(cè)定結(jié)果均符合生物樣品測(cè)定要求，證明該方法可用于考察烏頭堿的藥動(dòng)學(xué)和微透析樣品分析。 2、考察微透析技術(shù)對(duì)烏頭堿的體內(nèi)外回收率及其影響因素。從穩(wěn)定性和回收率兩方面優(yōu)化灌流溶液，最后選擇pH5.77等滲磷酸鹽緩沖液為最佳灌流液。體外回收率的測(cè)定采

2、用濃差法(增量法、減量法)、體內(nèi)回收率的測(cè)定采用減量法。體外回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：增量法及減量法測(cè)定的回收率一致；回收率隨灌流速度的增大而減小，探針的回收率與溶媒中烏頭堿的濃度無(wú)關(guān)。體內(nèi)皮下探針對(duì)烏頭堿的回收率為34.48±3.05％，烏頭堿在皮下探針中6小時(shí)回收率的變化基本上保持穩(wěn)定。本研究提示微透析取樣技術(shù)可用于烏頭堿的皮膚藥動(dòng)學(xué)研究。 3、考察烏頭堿口服給藥和經(jīng)皮給藥后的藥物動(dòng)力學(xué)行為。SD大鼠口服給藥(0.3mg/kg)及

3、皮膚局部給藥(25mg/kg)后于不同時(shí)間點(diǎn)取血，皮膚進(jìn)行微透析取樣，用上述建立的HPLC-MS/MS方法測(cè)定血漿中烏頭堿的濃度和皮膚微透析液中烏頭堿藥物濃度，根據(jù)所得的藥物濃度-時(shí)間曲線，采用非房室模型推算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果表明，SD大鼠口服給予烏頭堿后體內(nèi)血藥濃度消除較快，個(gè)體差異較大。經(jīng)非房室模型法估算的SD大鼠口服給藥烏頭堿原料藥后達(dá)峰時(shí)間為0.25h。達(dá)峰濃度為215.86±79.29ng/ml，藥時(shí)曲線末端消除半衰期為6.

4、47+4.00h；AUC0-∞為202.07±99.51ng/ml*h。經(jīng)皮給予烏頭堿后體內(nèi)血藥濃度比較穩(wěn)定。經(jīng)非房室模型法估算的SD大鼠凝膠給予烏頭堿原料藥后達(dá)峰時(shí)間為13h。達(dá)峰濃度為20.92±3.15ng/ml，藥時(shí)曲線末端消除半衰期為4.23±2.26h；AUC0-∞為161.02±54.22ng/ml*h?？诜o藥，皮膚中最大藥物濃度為1.51±0.53ng/ml，經(jīng)皮給藥后烏頭堿在皮膚中最大藥物濃度為2723.8±848.

5、8ng/ml。 4、應(yīng)用HPLC-ESI-MS/MS法鑒定大鼠灌胃給予烏頭堿后血漿中藥物代謝物以及皮膚勻漿反應(yīng)后代謝物。血漿和皮膚勻漿反應(yīng)液用蛋白沉淀法處理后應(yīng)用高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法在線進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，并對(duì)測(cè)得的微量代謝物進(jìn)行質(zhì)譜解析，發(fā)現(xiàn)血漿中測(cè)得兩種代謝物，分別鑒定為苯甲酰烏頭原堿和16-O-去甲基烏頭堿。皮膚勻漿中未測(cè)得代謝物。 5、烏頭堿口服給藥與經(jīng)皮給藥的PK/PD結(jié)合模型研究。用藥物動(dòng)力學(xué)-藥

6、效動(dòng)力學(xué)結(jié)合模型對(duì)烏頭堿口服給藥和透皮給藥在大鼠體內(nèi)處置及效應(yīng)作定量分析?？诜o藥和透皮給藥烏頭堿在大鼠體內(nèi)的血藥濃度藥代動(dòng)力學(xué)行為均符合一室開(kāi)放模型。以QT間期延長(zhǎng)率為效應(yīng)指標(biāo)，對(duì)藥物效應(yīng)用S型Emax模型擬合后，口服給藥的Emax，EC50，H，Keo，Kle值分別為4.19±4.26，233.98±54.25ng/ml，4.59±0.35，1.42±1.60 h-1，1.08±0.12 h-1，透皮給藥Emax，EC50，H，Ke

7、o，Kle值分別為2.48±0.04，78.18±35.22ng/ml，0.77±0.85，0.30±0.51 h-1，0.27±0.03 h-1。烏頭堿口服給藥與經(jīng)皮給藥之間的藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)參數(shù)均有明顯差異。 通過(guò)本課題的研究，建立了體內(nèi)烏頭堿分析的HPLC-MS/MS和微透析分析方法，為烏頭堿的體內(nèi)局部和系統(tǒng)藥動(dòng)學(xué)研究提供有力工具。通過(guò)PK/PD結(jié)合模型研究，建立了烏頭堿口服給藥和透皮給藥的安全評(píng)價(jià)系統(tǒng)，為有毒中藥臨床安全使