生長(zhǎng)追趕IUGR大鼠骨骼肌PGC-1α的DNA甲基化和基因表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、背景和目的:宮內(nèi)發(fā)育遲緩(intrauterine growth retardation,IUGR)尤其是伴隨生后出現(xiàn)生長(zhǎng)追趕(catch-up growth IUGR,CG-IUGR)的個(gè)體易發(fā)生胰島素抵抗,而過(guò)氧化物酶增殖物激活受體γ(PPARγ)的共激活因子-1α(PGC-1α)是營(yíng)養(yǎng)和能量代謝的關(guān)鍵調(diào)控點(diǎn),我們推測(cè)CG-IUGR大鼠骨骼肌中PGC-1α啟動(dòng)子的DNA甲基化及PGC-1α基因的表達(dá)水平可能發(fā)生了改變并在生長(zhǎng)追趕及胰

2、島素抵抗發(fā)生機(jī)制中起著重要作用。
  方法:將SPF級(jí)別的受孕第一天的SD雌鼠隨機(jī)分為正常飲食組和限食組,對(duì)限食組母鼠孕期全程限制飼料(約相當(dāng)于母鼠孕期正常食量的30%)并減少每窩仔鼠數(shù)量以建立CG-IUGR模型。于大鼠8周齡時(shí)處死并取其后肢骨骼肌,提取RNA、蛋白及DNA。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(realtime PCR)和免疫印跡(western blot)法檢測(cè)PGC-1α的mRNA及蛋白表達(dá)水平;對(duì)DNA進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化,

3、將轉(zhuǎn)化后的模板用于PCR擴(kuò)增PGC-1α啟動(dòng)子序列,用焦磷酸測(cè)序(pyrosequencing)的方法分析PGC-1α啟動(dòng)子上-803、-787、-582、-326、-215、-186及-178位點(diǎn)的甲基化水平。
  結(jié)果:8周齡的CG-IUGR大鼠骨骼肌組織中PGC-1α在mRNA和蛋白水平上均小于正常組(p<0.05),PGC-1α啟動(dòng)子上-803位點(diǎn)和-787位點(diǎn)的甲基化水平高于對(duì)照組(p<0.01)。大鼠體質(zhì)指數(shù)(BMI)

4、和PGC-1α啟動(dòng)子上-803位點(diǎn)(r=0.803)及-787位點(diǎn)(r=0.836)的甲基化水平呈正相關(guān)(p<0.01),BMI和PGC-1α的mRNA水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.764,p<0.05)。但PGC-1α的mRNA水平和PGC-1α啟動(dòng)子的-803位點(diǎn)和-787位點(diǎn)的甲基化水平無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(p>0.05)。
  結(jié)論:CG-IUGR大鼠骨骼肌PGC-1α啟動(dòng)子特異位點(diǎn)甲基化水平及PGC-1α表達(dá)量發(fā)生了改變,并均與BM

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