抗HBV S蛋白單克隆抗體的制備和生物學(xué)特性的研究.pdf

1、目的：乙型肝炎病毒感染危害巨大，慢性乙型肝炎至今仍缺乏有效的治療手段和解決方法，乙肝病毒感染機(jī)制的研究進(jìn)展相對滯后是嚴(yán)重影響新型治療方法和藥物研發(fā)的重要原因之一。HBsAg是機(jī)體感染乙型肝炎病毒(HBV)的標(biāo)志，也是機(jī)體感染HBV后血清中首先出現(xiàn)的病毒標(biāo)志物，在臨床上早期診斷乙型肝炎以及應(yīng)用于HBV的科研方面，有重要意義。本研究擬通過制備抗HBV S蛋白的單克隆抗體，對抗體生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定，為進(jìn)一步研究HBV奠定基礎(chǔ)。 方法：

2、 對購買的重組乙肝疫苗以SDS-PAGE進(jìn)行初步鑒定，并以間接ELISA方法鑒定其所含HBV S蛋白的特異性和免疫活性。 以此重組乙肝疫苗免疫Balb/c小鼠，采用雜交瘤技術(shù)制備抗HBVS蛋白的單克隆抗體，用間接ELISA法篩選分泌抗HBV S蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，采用間接ELISA方法和Western blot方法進(jìn)行McAb特異性鑒定；同時(shí)采用間接ELISA方法鑒定McAb的Ig亞類，檢測McAb的效價(jià)及相對

3、親和力；并對雜交瘤細(xì)胞的染色體進(jìn)行分析。 結(jié)果： 購買的重組乙肝疫苗所含的HBV S蛋白純度高，無降解，具有良好的特異性及免疫原性。 通過雜交瘤技術(shù)成功獲得1株可分泌特異性McAb的雜交瘤細(xì)胞4D2。其抗體亞類為IgGl；將生長良好的雜交瘤細(xì)胞接種到預(yù)處理的Balb/c小鼠腹腔中制備腹水型單抗，間接ELISA試驗(yàn)證實(shí)腹水效價(jià)可達(dá)1:108，相對親和力在105以上。間接ELISA法和Western bolt檢測證明