副豬嗜血桿菌外膜蛋白OmpP5單克隆抗體的制備及其生物學特性研究.pdf

1、副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS)是一種多形性的革蘭氏陰性短桿菌，屬巴斯德桿菌科、嗜血桿菌屬，是一種存在于豬上呼吸道的共棲菌，可引起以多發(fā)性漿膜炎、關節(jié)炎、腦膜炎為主要特征，死亡率較高的豬格氏病。該菌已鑒定的有15個血清型，還有部分不能定型的菌株，各菌株之間缺乏交叉免疫保護性，關于其毒力因子和致病機制仍不十分清楚。外膜蛋白（Outer member protein，Omp）是副豬嗜血桿菌可能的毒力因子之一，

2、其中外膜蛋白Omp P5是該菌的一種主要粘附蛋白，與細菌的定植有關，是副豬嗜血桿菌主要外膜蛋白之一，用其制備的多抗血清與各血清型HPS菌株抗原之間有交叉反應性，是一種可能的保護性抗原。單克隆抗體有著特異性強、重復性好的特點，廣泛應用于傳染病的診斷、治療、檢疫、預防和流行病學研究中的應用。
　　本研究用滅活后的血清5型HPS菌株免疫Balb/c小鼠，取免疫小鼠脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行融合制備Omp P5單克隆抗體；用Omp

3、P5蛋白經(jīng)間接ELISA檢測方法篩選陽性融合孔，用有限稀釋法對篩選出的陽性融合孔進行亞克隆，獲得了2株分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為1E2和8D9；用間接ELISA法測定1E2、8D9兩株雜交瘤細胞培養(yǎng)上清抗體效價，效價均為1:2560；同法測定小鼠純化后腹水抗體效價，分別為1:204800和1:51200；用亞型鑒定試劑盒對單克隆抗體的亞型進行鑒定，結(jié)果顯示單抗1E2為IgG2b、8D9為IgG2a；用本實驗室建立的基于HP