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文檔簡介
1、研究目的 通過建立糖尿病大鼠燙傷創(chuàng)面難愈模型,了解糖尿病狀態(tài)下創(chuàng)面愈合的規(guī)律,闡述糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)蓄積與氧化應(yīng)激在糖尿病創(chuàng)面難愈發(fā)生中的作用,研究應(yīng)用氨基胍對糖尿病燙傷創(chuàng)面愈合的影響,開展氨基胍防治糖尿病創(chuàng)面難愈的臨床前藥效學(xué)研究。 研究方法 動物實驗分為預(yù)防性應(yīng)用氨基胍的長病程糖尿病實驗(A)、治療性應(yīng)用氨基胍的長病程糖尿病實驗(B)和治療性應(yīng)用氨基胍的短病程糖尿病實驗(C)三部分。A實驗是在糖尿病
2、模型成功的同時給予氨基胍,再經(jīng)6周飼養(yǎng)后致傷;B實驗是先建立糖尿病模型,再經(jīng)6周飼養(yǎng)后致傷,致傷當(dāng)天應(yīng)用氨基胍;C實驗則是糖尿病模型成功后不經(jīng)6周飼養(yǎng),即予燙傷并同時應(yīng)用氨基胍。每部分實驗動物隨機(jī)分為:非糖尿病對照組、糖尿病對照組和氨基胍干預(yù)組,氨基胍干預(yù)組每日管飼氨基胍100mg/Kg體重。以致傷當(dāng)天未燙傷大鼠為0時相點,檢測燙傷后3、7、14和2l天時相點各組創(chuàng)面愈合率,0時相點皮膚組織糖含量、AGEs熒光強(qiáng)度、膠原溶解度,傷后各時
3、相點血漿中糖化血漿蛋白(GSP)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、H<,2>0<,2>等含量。 體外實驗分為AG對葡萄糖自發(fā)氧化形成AGEs以及對H<,2>0<,2>干預(yù)下成纖維細(xì)胞功能的影響兩部分。前者運用葡萄糖與牛血清白蛋白(BSA)體外氧化形成AGEs,檢測AG對AGEs形成及其過程中乙二醛(G0)、H<,2>0<,2>產(chǎn)生的影響,觀察AGEs對大鼠白細(xì)胞活性氧產(chǎn)生的影響;后者運用H<,2>0<,2>干預(yù)大鼠成纖維細(xì)
4、胞,檢測AG對H<,2>O<,2>干預(yù)下細(xì)胞凋亡、活性氧(ROS)、GSH、MDA、AGEs等含量變化的影響。 研究結(jié)果 A實驗中,預(yù)防性應(yīng)用氨基胍后,與糖尿病對照組相比,創(chuàng)面愈合率顯著增加,AGEs顯著降低,皮膚膠原溶解度顯著上升,而皮膚組織糖含量無顯著變化。B實驗中,傷后應(yīng)用氨基胍可顯著促進(jìn)長病程糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合,并可使糖尿病狀態(tài)下升高的血漿G0和H<2>O<,2>顯著下降,下降的GSH顯著升高;而對糖尿病狀態(tài)下升
5、高的GSP影響不明顯。 C實驗中,短病程糖尿病組織中AGEs蓄積不顯著,但血漿MDA顯著升高;短其應(yīng)用氨基胍不能顯著抑制AGEs蓄積,但可顯著降低MDA含量,改善氧化應(yīng)激。 葡萄糖在開放的有氧環(huán)境中可發(fā)生自發(fā)氧化形成AGEs,此過程中可產(chǎn)生GO、H<,2>O<,2>;GO也可形成AGEs,但可被氨基胍顯著抑制;AGEs可使白細(xì)胞活性氧釋放增加,呈現(xiàn)出劑量依賴關(guān)系。 H<,2>O<,2>使成纖維細(xì)胞活力下降,呈現(xiàn)劑
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