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文檔簡介
1、研究背景:
糖尿病慢性創(chuàng)面難以愈合一直是臨床治療的難點,目前仍缺乏一種令人滿意的治療方法,其治療周期長,費(fèi)用高,成為糖尿病患者高致殘率和高死亡率的主要原因之一,因此尋找一種簡單有效的治療方法將具有重要的意義。體外震波(extracorporeal shock wave,ESW)是一種特殊類型的聲波,最初高能量的ESW被用來治療各種泌尿系統(tǒng)結(jié)石,近年來,它作為一種非侵入性的物理治療方法已在多個歐美國家被用于治療多種骨和軟組織
2、疾病,發(fā)現(xiàn)低能量的ESW具有促進(jìn)新生血管形成和組織修復(fù)的功能。最近臨床上已有學(xué)者開始嘗試將ESW用于治療各種慢性創(chuàng)面,并取得了良好的治療效果,然而在治療糖尿病慢性創(chuàng)面方面,目前研究仍較少,其促進(jìn)愈合的效果和機(jī)制尚不清楚。
目的:
通過建立糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面模型,觀察低能量體外震波治療對糖尿病慢性創(chuàng)面的修復(fù)中的作用,并從血管形成和膠原合成兩個方面分析其促進(jìn)創(chuàng)面愈合機(jī)制,從而為臨床上治療糖尿病慢性潰瘍提供一種新的
3、手段,為ESW的臨床應(yīng)提供理論依據(jù)。
方法:
1.STZ腹腔注射誘導(dǎo)建立糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面模型,比較不同糖尿病組和正常組時間點創(chuàng)面愈合率和愈合時間。HE和Masson染色觀各組創(chuàng)面組織形態(tài)學(xué)變化特點。
2.選擇不同治療參數(shù)的低能量ESW干預(yù)創(chuàng)面,比較不同治療參數(shù)ESW對創(chuàng)面愈合率的影響。比較低能量ESW作用后,創(chuàng)面內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)目、微血管密度、細(xì)胞增殖與膠原纖維百分比的變化。
3.
4、低能量ESW干預(yù)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs),觀察對細(xì)胞活力、增殖、細(xì)胞遷移、體外成管能力的影響。qRT-PCR和Western-blot檢測糖尿病大鼠術(shù)后3d、7d和14d創(chuàng)面組織血管內(nèi)皮生長因子(VEGF) mRNA和蛋白的表達(dá)。
4.低能量ESW干預(yù)體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞(Hs27),觀察對細(xì)胞活力、增殖能力的影響,檢測細(xì)胞培養(yǎng)液羥脯氨酸的含量。建立糖尿病大鼠切割傷模型,測量傷后7d和14d切口斷裂
5、強(qiáng)度和羥脯氨酸含量,qRT-PCR和Western-blot檢測創(chuàng)面組織轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1) mRNA和蛋白的表達(dá).
結(jié)果:
1.STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面模型可以很好地觀察創(chuàng)面的愈合過程,組織學(xué)特點具有炎癥反應(yīng)加重、上皮化進(jìn)程緩慢、新血管形成減少、膠原含量降低的特點。
2.脈沖數(shù)在100-400脈沖/cm2的低能量ESW治療可以顯著提高創(chuàng)面愈合率、降低愈合時間。低于50脈沖/
6、cm2的低能量ESW不具備促進(jìn)愈合作用,超過800脈沖/cm2的低能量ESW對創(chuàng)面肉芽組織造成破壞作用,延遲創(chuàng)面的愈合。ESW組創(chuàng)面內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)目減少、微血管密度、PCNA表達(dá)、膠原的纖維百分比均高于糖尿病組,與對照組相比均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
3.低能量ESW干預(yù)后,HUVECs體外血管形成的能力增加,表現(xiàn)為細(xì)胞增殖、遷移、體外成管的能力增強(qiáng)。體內(nèi)實驗顯示ESW組大鼠3d、7d、14d時創(chuàng)面組織VEGF-A
7、 mRNA和蛋白的表達(dá)均高于糖尿病組。上述差異與對照組相比均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
4.與對照組相比,ESW組Hs27細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞培養(yǎng)上清液羥脯氨酸含量,大鼠切口傷斷裂強(qiáng)度和羥脯氨酸含量,創(chuàng)面內(nèi)TGF-β1mRNA和蛋白的表達(dá)均升高,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:
1.通過腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ),背部制作皮膚缺損,能夠成功誘導(dǎo)大鼠糖尿病慢性創(chuàng)面模型,表現(xiàn)為創(chuàng)
8、面愈合率低下,愈合時間延長,并且符合臨床上糖尿病皮膚潰瘍的病理特征。
2.適合治療參數(shù)的ESW可以促進(jìn)糖尿病創(chuàng)面的愈合,促進(jìn)糖尿病創(chuàng)面的效果與脈沖數(shù)和治療次數(shù)有關(guān)。ESW促進(jìn)糖尿病創(chuàng)面愈合通過抑制炎癥反應(yīng)、加快上皮化進(jìn)程、增加血管新生與膠原的合成。
3.低能量ESW具有促進(jìn)糖尿病創(chuàng)面血管形成的功能,這與其能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、體外成管能力,上調(diào)創(chuàng)面內(nèi)VEGF的表達(dá)有關(guān)。
4.低能量ESW
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