二氮嗪預(yù)處理抗缺氧復(fù)氧后大鼠海馬神經(jīng)元凋亡作用的研究.pdf

1、目的: 1、探討二氮嗪預(yù)處理抗缺氧復(fù)氧后大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的同時，是否對Akt、Bcl-2和Bax蛋白表達產(chǎn)生影響。 2、在前一實驗的基礎(chǔ)上，探討二氮嗪預(yù)處理對缺氧復(fù)氧后大鼠海馬神經(jīng)元Bcl-2、Bax蛋白表達的影響是否經(jīng)或部分經(jīng)Akt信號通路介導(dǎo)的。 方法: 1、將海馬神經(jīng)元分為正常對照組(A組)、缺氧組(B組)、缺氧+DZ預(yù)處理組(C組)、缺氧+DZ+5-HD預(yù)處理組(D組)、缺氧+5-HD預(yù)處理組(

2、E組)，每次實驗每組采用16孔或2孔，實驗重復(fù)3次。自缺氧前2天開始，缺氧組(B組)、缺氧+DZ預(yù)處理組(C組)、缺氧+DZ+5-HD預(yù)處理組(D組)、缺氧+5-HD預(yù)處理組(E組)分別加入終濃度為DZ 0μmol/L、DZ 100μmol/L、DZ 100μmol/L+5-HD 100μmol/L、5-HD100μmol/L預(yù)處理。復(fù)氧后24小時，觀察海馬神經(jīng)元狀態(tài)的變化；四唑藍比色法行細胞活力測定；流式細胞術(shù)檢測海馬神經(jīng)元的凋亡率；

3、Western blot法測定海馬神經(jīng)元Akt、Bcl-2、Bax蛋白的表達程度。 2、將海馬神經(jīng)元分為正常對照組(A組)、缺氧組(B組)、缺氧+DZ預(yù)處理組(C組)、缺氧+DZ+LY294002預(yù)處理組(D組)，每次實驗每組16孔或2孔，實驗重復(fù)3次。自缺氧前2天開始，缺氧組(B組)、缺氧+DZ預(yù)處理組(C組)、缺氧+DZ+LY294002預(yù)處理組(D組)分別加入終濃度為DZ 0μmol/L、DZ 100μmol/L、DZ 1

4、00μmol/L+LY294002 50μmol/L預(yù)處理。復(fù)氧后24小時，觀察海馬神經(jīng)元狀態(tài)的變化；四唑藍比色法行細胞活力測定；流式細胞術(shù)檢測海馬神經(jīng)元的凋亡率；Western blot法測定海馬神經(jīng)元Akt、Bcl-2、Bax蛋白的表達程度。 結(jié)果: 1、C組較其它三組缺氧組，存活的神經(jīng)元的數(shù)目較多，形態(tài)較好，細胞壞死脫落較少，細胞間連接存在；C組海馬神經(jīng)元的活力顯著低于A組(P<0.01)，但明顯高于其它三組缺氧組

5、(P<0.01)；C組海馬神經(jīng)元的早期凋亡率顯著高于A組(P<0.01)，但明顯低于其它三組缺氧組(P<0.01)：C組海馬神經(jīng)元與A組比較，Akt、Bcl-2、BaX蛋白表達均增強(P<0.01)，與其它三組缺氧組比較，Akt、Bcl-2蛋白表達增強(P<0.01)，Bax蛋白表達減弱(P<0.01)。 2、與C組比較，D組中大量細胞壞死脫落，殘余細胞稀疏，失去正常形態(tài)，細胞間連接減少；D組海馬神經(jīng)元的活力顯著低于C組(P<0

6、.01)，與B組比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；D組海馬神經(jīng)元的早期凋亡率顯著高于C組(P<0.01)，與B組比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；D組與C組比較，Akt、Bcl-2蛋白的表達均減弱(P<0.01)，Bax蛋白的表達增強(P<0.01)；與B組比較，Akt、Bcl-2、Bax蛋白的表達差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論: l、二氮嗪預(yù)處理使缺氧復(fù)氧后大鼠海馬神經(jīng)元的活力提高，早期凋亡率降低。