氯喹抑制自噬對海馬神經(jīng)元(HT22細胞)缺氧-復(fù)氧損傷的影響.pdf

1、目的：本研究模擬腦缺血-再灌注損傷，復(fù)制海馬神經(jīng)元（HT22細胞）缺氧-復(fù)氧損傷模型以觀察缺氧-復(fù)氧對海馬神經(jīng)元自噬的影響，探討自噬變化在海馬神經(jīng)元缺氧-復(fù)氧損傷過程中的可能作用。
　　方法：1.根據(jù)文獻自制密閉缺氧裝置，待HT22海馬神經(jīng)元融合度達80％后，放入缺氧裝置內(nèi)，通入95%N2+5% CO2混合氣體造成細胞缺氧。實驗分三組，以相應(yīng)時間的正常培養(yǎng)為對照，分別觀察缺氧1h、3h和6h對 HT22細胞自噬和功能的影響。檢測指

2、標(biāo)包括， Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ比值的變化以及P62的表達水平，MTT比色法檢測細胞存活率，乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒比色法檢測HT22細胞的功能。2.缺氧1h后恢復(fù)氧供應(yīng)以復(fù)制缺氧-復(fù)氧損傷模型。實驗分三組：以相應(yīng)時間的正常培養(yǎng)和缺氧培養(yǎng)為對照，Western blot觀察復(fù)氧1h、3h、6h對HT22細胞自噬的影響。3.以缺氧1h復(fù)氧1h為缺氧-復(fù)氧損傷模型觀察自噬抑制劑氯喹對海馬神經(jīng)

3、元（HT22細胞）功能的影響。實驗分為四組：⑴對照組⑵氯喹組⑶缺氧-復(fù)氧組⑷缺氧-復(fù)氧+氯喹組。檢測指標(biāo)包括，Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ比值的變化以及P62的表達水平，乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒比色法檢測HT22細胞的功能。
　　結(jié)果：1.HT22細胞缺氧1h、3h、6h時，各組自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的比值表達均增高，P62蛋白的表達均減弱；細胞的存活率均下降，LDH

4、釋放量均增加；自噬程度以缺氧1h組最為突出。2.HT22細胞復(fù)氧1h、3h、6h時，與相應(yīng)時間的正常培養(yǎng)和缺氧培養(yǎng)相比各組自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的比值表達均增高，P62蛋白的表達均減弱，以復(fù)氧1h自噬程度最為突出。3.氯喹抑制HT22細胞缺氧-復(fù)氧誘導(dǎo)的自噬，自噬相關(guān)蛋白 Beclin-1表達減弱、LC3Ⅱ/Ⅰ的比值以及P62蛋白的表達增高，細胞損傷減輕。
　　結(jié)論：1.缺氧誘導(dǎo)HT22細胞自噬，引起細胞損傷。