異氟烷致新生大鼠睪丸生殖細胞凋亡及機制研究.pdf

1、目的:
　　探討臨床相關(guān)濃度的異氟烷對新生大鼠睪丸生殖細胞的影響及其作用機制。本課題為最終闡明吸入性全身麻醉藥的生殖毒性及其作用機制,指導(dǎo)全身麻醉藥的安全合理應(yīng)用,以及探索其毒性作用的有效防治手段等方面提供了理論依據(jù)。
　　方法:
　　60只出生1天(P1d)雄性大鼠隨機分為對照組和實驗組,對照組大鼠自主吸入空氣,實驗組大鼠則分別暴露于1MAC異氟烷+30％O2中2h、4h和6h(2h組、4h組及6h組)。運用TUNE

2、L法對大鼠睪丸生殖細胞的凋亡進行評價;Western Blot法對大鼠睪丸生殖細胞Bcl-2、Bax、細胞色素C(Cytochrome C)和活化Caspase-3蛋白質(zhì)表達水平進行檢測;Real-Time PCR法對大鼠睪丸生殖細胞Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3 mRNA表達水平進行測定。
　　結(jié)果:
　　TUNE結(jié)果顯示,對照組大鼠睪丸的生精小管內(nèi)很少出現(xiàn)凋亡的陽性細胞,異氟烷暴露2h、

3、4h、6h組均使大鼠睪丸的平均每生精小管內(nèi)陽性細胞數(shù)顯著增加。與對照組相比,實驗組大鼠睪丸細胞Bcl-2蛋白水平表達下調(diào)(P<0.05);且Bcl-2蛋白的表達在6h組較4h組下調(diào)(P<0.05)。4h和6h組與空白對照組相比較,大鼠睪丸細胞Bcl-2 mRNA水平表達下調(diào)(P<0.05);Bcl-2 mRNA的表達在2h、4h和6h依次下調(diào)(P<0.05)。實驗組大鼠的Bax的蛋白質(zhì)表達水平較對照組上調(diào)(P<0.05);4h暴露組與2

4、h暴露組相比,表達上調(diào)(P<0.05)。4h、6h暴露組與空白對照組相比較,Bax mRNA表達水平明顯上調(diào)(P<0.05);Bax的mRNA的表達水平在2h、4h和6h依次上調(diào)(P<0.05)。與對照組比較,異氟烷暴露2h、4h、6h均使大鼠睪丸Cytochrome C蛋白表達增加(P<0.05)。Cytochrome C mRNA的表達在4h和6h組表達上調(diào)(P<0.05)。睪丸內(nèi)活化Caspase-3蛋白及Caspase-3的mR

5、NA表達量在實驗組均明顯升高,與空白對照組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);活化Caspase-3蛋白及Caspase-3 mRNA的表達在2h組、4h組和6h組依次上調(diào)(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　通過對新生大鼠暴露于異氟烷的研究證實,P1d大鼠暴露于1MAC的異氟烷2h將致睪丸生殖細胞凋亡,隨著暴露時間延長至6h,其凋亡效應(yīng)呈現(xiàn)時間依賴性。Bcl-2、Bax和Cytochrome C參與了異氟烷所致的新生大鼠