蛇毒因子消耗補(bǔ)體對(duì)大鼠同種心臟移植急性排斥反應(yīng)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的和背景:同種異體心臟移植是治療終末期心臟疾病以挽救病人生命的重要手段,但移植后免疫排斥反應(yīng)制約了心臟移植的治療效果,雖然臨床上使用免疫抑制劑藥物使同種異體心臟移植的一年存活率大幅度提高,達(dá)到80﹪,但與此同時(shí)也帶來了許多致命的副作用,因此,深入探討同種移植急性排斥反應(yīng)的機(jī)制,探索發(fā)展抑制排斥反應(yīng)或誘導(dǎo)移植物耐受的新手段和新藥物,是最終克服移植排斥反應(yīng)的有效途徑.傳統(tǒng)移植免疫理論認(rèn)為補(bǔ)體系統(tǒng)的激活是抗體介導(dǎo)的急性排斥反應(yīng)和異種移植

2、超急性排斥反應(yīng)的最主要機(jī)制,而同種移植急性排斥反應(yīng)發(fā)生的主要機(jī)制是T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的針對(duì)同種異型抗原(MHC等)的特異性免疫應(yīng)答,補(bǔ)體系統(tǒng)對(duì)同種移植急性排斥反應(yīng)無明顯影響.但Julian R Pratt等于1996年在Lewis-DA大鼠同種異體腎移植模型上,利用sCR1抑制受體血清中的C3,將移植腎出現(xiàn)Ⅲ度排斥反應(yīng)的時(shí)間由5天延后至9天,同時(shí)發(fā)現(xiàn)給藥組移植腎中CD4<'+>、CD8<'+> T細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞浸潤的數(shù)量都大大減少.200

3、0年,Julian R. Pratt等發(fā)現(xiàn)小鼠腎移植后,IL-2和IFN-γ的增加可促進(jìn)移植腎腎小管分泌C3.2002年,Pratt等分別將野生型C57BL/6<'H-2b>和C57BL/6<'H-2b>(C3<'-/->)小鼠的腎臟移植給B10.Br<'H-2k>小鼠,發(fā)現(xiàn)B10.Br<'H-2k>小鼠平均在12.5天排斥來源于野生型C57BL/6<'H-2b>的移植腎,而來自C57BL/6<'H-2b>(C3<'-/->)小鼠的移植

4、腎卻獲得了長期存活(>100天),同時(shí)將B10.Br<'H-2k>小鼠的腎臟移植給C57BL/6<'H-2b>(C3<'-/->)小鼠,其移植腎平均存活時(shí)間僅為16.2天,從而提出移植腎局部的皮質(zhì)腎小管上皮細(xì)胞分泌的補(bǔ)體成分C3可以調(diào)節(jié)同種腎移植急性排斥反應(yīng)這一觀點(diǎn).以上文獻(xiàn)都表明,補(bǔ)體系統(tǒng)確實(shí)以某種方式參與了同種移植急性排斥反應(yīng)發(fā)生和發(fā)展的過程,進(jìn)一步明確其作用和機(jī)制不僅對(duì)擴(kuò)展同種移植排斥反應(yīng)免疫學(xué)機(jī)制的認(rèn)識(shí)具有重要的理論價(jià)值,而且可

5、為探索發(fā)展新的抑制移植排斥反應(yīng)的手段和藥物奠定基礎(chǔ).目前,尚未見到有關(guān)補(bǔ)體在同種心臟移植急性排斥反應(yīng)中所起作用的研究報(bào)道,該實(shí)驗(yàn)擬在Wistar-SD大鼠同種心臟移植模型上,利用CVF消耗受體血清中補(bǔ)體,并觀察移植心的存活時(shí)間及其不同時(shí)期的病理改變和淋巴細(xì)胞浸潤情況,為探索發(fā)展新的抑制移植排斥反應(yīng)的手段和藥物提供線索,并初步探討補(bǔ)體系統(tǒng)在同種心臟移植急性排斥反應(yīng)發(fā)生機(jī)制中的作用.方法:該研究主要進(jìn)行了以下三方面工作:1、應(yīng)用改良Ono術(shù)

6、式建立大鼠同種異位心臟移植動(dòng)物模型.2、將小劑量CVF應(yīng)用于SD大鼠,用CH<,50>法測定大鼠注射CVF后血清補(bǔ)體活性的變化,以了解該種CVF的抗補(bǔ)體活性及毒副作用,并確定長時(shí)間用藥的方法.3、建立兩組Wistar-SD大鼠同種心臟移植模型,一組作為對(duì)照組,一組作為CVF治療組.首先利用觸摸法監(jiān)測移植心存活情況,觀察兩組移植心存活時(shí)間;其次從兩組中各抽取5只動(dòng)物模型分別于1、3、5、6、7天活殺,分別比較各時(shí)間點(diǎn)的急性排斥反應(yīng)病理分級(jí)

7、,血清補(bǔ)體活性,C3沉積情況,以及CD3<'+>、CD4<'+>和CD8<'+>T細(xì)胞的浸潤程度.結(jié)果:(1)成功建立了大鼠同種異位心臟移植動(dòng)物模型.(2)大鼠尾靜脈注射小劑量CVF 2h血清補(bǔ)體活性即顯著下降,并于4h達(dá)到最低,此后1-3d保持在10﹪以下,8d恢復(fù)到35.14﹪,10d才基本恢復(fù)正常(62.02﹪).(3)CVF治療組移植心臟存活時(shí)間較對(duì)照組顯著延長(р<0.01),其中部分移植心存活時(shí)間大于60天;免疫組織化學(xué)檢測

8、證實(shí),實(shí)驗(yàn)組1-7d血管壁及心肌組織內(nèi)未見C3沉著,內(nèi)皮細(xì)胞未見腫脹、壞死,而同期對(duì)照組血管壁及基底層可見C3沉著,血管內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、壞死;免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組CD4<'+>、CD3<'+>以及CD8<'+>T淋巴細(xì)胞浸潤情況較對(duì)照組同期明顯減輕.結(jié)論1、改良Ono術(shù)式建立的Wistar大鼠至SD大鼠同種異位心臟移植模型穩(wěn)定可靠,是研究同種心臟移植的理想小動(dòng)物模型;2、來源于云南產(chǎn)孟加拉眼睛蛇的CVF,經(jīng)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)該藥物在