移植物熱缺血影響大鼠小腸移植排斥反應(yīng)的實驗研究.pdf

1、目的：探討移植物熱缺血再灌注損傷對大鼠小腸排斥反應(yīng)的影響及其作用機制。 方法：利用顯微外科技術(shù)構(gòu)建同系和異系大鼠異位及二期原位小腸移植模型。觀察行原位小腸移植受體的生存率并在實驗終點獲取移植物及血標(biāo)本行常規(guī)病理學(xué)檢查，同時檢測受體大鼠血漿中D-乳酸和DAO的含量；在異位小腸移植術(shù)后第1天、第2天連續(xù)獲取移植物，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測移植物內(nèi)TLR-4、NF-κB表達定位及強度，應(yīng)用QRt-PCR技術(shù)檢測移植物內(nèi)TLR-4mRN

2、A轉(zhuǎn)錄水平并于術(shù)后第2天獲取受體大鼠腹腔引流淋巴結(jié)，應(yīng)用流式細胞儀檢測其中CD103、CD86雙陽性細胞的百分率；在異位小腸移植術(shù)后第3天、第5天、第7天連續(xù)獲取移植小腸，常規(guī)病理學(xué)檢查進行排斥反應(yīng)評分的判定并行CD8+免疫組化染色觀察移植物內(nèi)CD8+細胞的浸潤；利用異位移植術(shù)后第5天所獲移植物標(biāo)本檢測IFN-γ、IL-4的mRNA轉(zhuǎn)錄水平并應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡對移植物內(nèi)IgG2aIgG1的表達情況進行觀察。 結(jié)果：1.同系移植

3、組術(shù)后第14天隨著熱缺血時間的延長，受體的存活時間縮短，其中W0組、W30組、W60組的存活時間無顯著性差異；異系移植組術(shù)后第7天隨著熱缺血時間的延長，受體的存活時間縮短，其中W0組與W30組的存活時間無顯著性差異。 2.同系移植組術(shù)后第14天隨熱缺血時間的延長，受體血漿D乳酸、DAO的含量升高；異系移植組術(shù)后第5天血漿D乳酸和DAO的含量隨熱缺血時間的延長而升高。 3.在術(shù)后第1天，TLR-4主要表達在移植物粘膜上皮，

4、相同熱缺血時間組間無顯著性差異，隨熱缺血時間的延長表達強度增加；在術(shù)后第2天，TLR-4主要表達在移植小腸固有層內(nèi)單個核細胞(以單核細胞為主)，相同熱缺血時間組間無顯著性差異，隨熱缺血時間的延長表達強度增加。 4.TLR-4陽性單個核細胞數(shù)目、成熟樹突細胞百分率隨著熱缺血時間的延長而升高并與小腸粘膜損傷評分呈明顯正相關(guān)。 5.術(shù)后第3天，W60組可見明顯的CD8+細胞浸潤，與W0組間有顯著性差異；術(shù)后第5天，各組間CD8

5、+細胞數(shù)目有顯著性差異，表現(xiàn)為隨熱缺血時間的延長移植物內(nèi)CD8+細胞浸潤數(shù)目呈逐漸增高。 6.術(shù)后第3天與術(shù)后第5天排斥反應(yīng)評分在W0組和W30組無顯著性差異，而在W60組則具有顯著性差異；術(shù)后第5天各組間排斥反應(yīng)評分具有顯著性差異，隨熱缺血時間的延長排斥反應(yīng)評分增高。 7.術(shù)后第5天IFN-γ和IL-4mRNA轉(zhuǎn)錄水平隨著熱缺血時間的延長而升高，組間具有顯著性差異，其變化趨勢與移植物排斥反應(yīng)評分呈正相關(guān)。 8.

6、術(shù)后第5天移植物內(nèi)IgG2a和IgG1的表達水平隨著熱缺血時間的延長而升高，組間具有顯著性差異，其變化趨勢與移植物排斥反應(yīng)評分呈正相關(guān)。 結(jié)論：1.在同系小腸移植中，移植物可以耐受60分鐘的熱缺血；在未應(yīng)用免疫抑制劑的情況下，同種異體移植物短時間內(nèi)可以耐受30分鐘的熱缺血。 2.熱缺血再灌注損傷使移植小腸的通透性升高、屏障功能降低。 3.小腸粘膜上皮作為參與TLR-4反應(yīng)的細胞之一，在熱缺血再灌注損傷中可能是最早