2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、人胸腺素α1(Tα1)是一種28個氨基酸組成的具有免疫增強作用的生物活性多肽,其具有廣泛的生物學(xué)功能,如免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗腫瘤、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)等。目前Tα1被廣泛應(yīng)用于慢性病毒性肝炎、細菌或真菌感染、免疫缺陷以及腫瘤等疾病的治療,具有重大的經(jīng)濟效益與社會價值,因此Tα1的功能研究與生產(chǎn)制備的探索都具有重要意義。本文將Tα1基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌中表達并進行化學(xué)修飾,同時研究其對腫瘤細胞的周期阻滯作用。
   本實驗首先以實驗室保存的核酸

2、片段為模板,人工合成了Tα1的核酸序列,將其與pTWINⅠ質(zhì)粒中的內(nèi)含肽自剪切序列(Ssp)相連,通過EcoRⅠ與XhoⅠ雙酶切與pET-32a質(zhì)粒連接,成功構(gòu)建了大腸桿菌表達載體pET-32a-Ssp-Tα1,并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)菌株從而獲得有效表達(目的蛋白占總蛋白50%以上)。我們通過一系列實驗確認目的蛋白主要以可溶形式存在于菌體內(nèi),優(yōu)化了表達條件(37℃,IPTG終濃度0.5 mM),并通過細胞破碎、收集離心上清、分

3、子篩層析與Ni+親和層析等過程純化了重組蛋白。然后改變環(huán)境pH以誘導(dǎo)融合蛋白發(fā)生內(nèi)切割,收集得到了N端無乙酰的Tα1單體,酸性環(huán)境下(pH3-4)使用醋酸酐對其進行體外乙?;瘡亩玫搅送暾Y(jié)構(gòu)的Tα1多肽,并對其進行HPLC純化與質(zhì)譜分析,驗證了其分子量(3108 Da)。另外本實驗通過western-blot,研究了Tα1作用下HepG-2細胞內(nèi)部分細胞周期調(diào)控因子的表達水平變化,發(fā)現(xiàn)Tα1能夠誘導(dǎo)腫瘤細胞內(nèi)Akt信號通路的阻滯和p5

4、3通路的激活,在降低cyclins與CDKs的表達水平的同時促進CDKI的表達,進而阻滯細胞周期于G1期。
   本實驗在大腸桿菌表達系統(tǒng)中有效表達Tα1融合蛋白后,又通過內(nèi)含肽誘導(dǎo)的蛋白自剪切技術(shù)得到Tα1單體,簡化了Tα1的生產(chǎn)工藝并有望降低其成本,為大量生產(chǎn)Tα1滿足臨床需求開辟了新途徑。同時發(fā)現(xiàn)Tα1能通過調(diào)控細胞周期調(diào)控因子的表達水平來阻滯腫瘤細胞的生長周期,為進一步研究Tα1的生物功能提供了新的思路,也為Tα1臨床應(yīng)

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