寡核苷酸探針原位雜交和原位RT-PCR檢測(cè)石蠟切片中PRRSV方法的建立及其應(yīng)用.pdf

1、據(jù)Gen=Bank中有關(guān)PRRSV的ORF6和ORF7保守序列，應(yīng)用Oligo設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)一套引物，液相PCR擴(kuò)增出了預(yù)期長(zhǎng)度為298bp的片段；另外在擴(kuò)增片段長(zhǎng)度范圍內(nèi)，應(yīng)用Oligo軟件設(shè)計(jì)一條長(zhǎng)度為37bp的寡核苷酸探針，建立了能特異的從人工感染PRRSV仔豬組織石蠟切片中檢測(cè)出PRRSV核酸的原位雜交和間接原位反轉(zhuǎn)錄PCR方法?！　?yīng)用建立的原位雜交檢測(cè)PRRSVSC-1株人工感染不同時(shí)間在仔豬體各組織器官的分布規(guī)律，結(jié)果表明

2、：感染后3d分別在扁桃體、淋巴結(jié)中檢測(cè)到PRRSV核酸RNA，感染后5d病毒RNA出現(xiàn)在肺臟、胸腺，感染后7d從腎、腦、腸、脾臟、肝臟中檢測(cè)到病毒。肺、腎臟、腦中病毒RNA含量較少；睪丸、附睪偶爾出現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)；子宮、心臟、胰腺在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均呈陰性反應(yīng)。　　應(yīng)用原位雜交檢測(cè)各組織，結(jié)果表明，淋巴結(jié)陽(yáng)性信號(hào)散在于整個(gè)淋巴小結(jié)。肺臟陽(yáng)性信號(hào)主要分布于肺泡膈間質(zhì)的巨噬細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞。扁桃體陽(yáng)性信號(hào)分布于其中的淋巴小結(jié)的生發(fā)中心以及間

3、質(zhì)巨噬細(xì)胞。胸腺中PRRS病毒多出現(xiàn)在髓質(zhì)部，皮質(zhì)中有少許細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)。在脾臟中陽(yáng)性細(xì)胞為少許淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。肝臟陽(yáng)性部位主要位于肝竇以及少量的肝細(xì)胞。腎臟陽(yáng)性信號(hào)位于腎小球及其周?chē)?。腸道陽(yáng)性信號(hào)位于腸集合淋巴結(jié)及腸粘膜上皮細(xì)胞?！　?yīng)用間接原位RT-PCR檢測(cè)扁桃體、脾臟、肺門(mén)淋巴結(jié)、胸腺，人工感染后1d即可檢測(cè)出扁桃體陽(yáng)性，感染后3d檢測(cè)出淋巴結(jié)、胸腺、脾臟陽(yáng)性?！　”狙芯繉?duì)建立的原位雜交方法和間接原位RT-PCR方法檢測(cè)