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1、據(jù)Gen=Bank中有關(guān)PRRSV的ORF6和ORF7保守序列,應(yīng)用Oligo設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)一套引物,液相PCR擴(kuò)增出了預(yù)期長度為298bp的片段;另外在擴(kuò)增片段長度范圍內(nèi),應(yīng)用Oligo軟件設(shè)計(jì)一條長度為37bp的寡核苷酸探針,建立了能特異的從人工感染PRRSV仔豬組織石蠟切片中檢測出PRRSV核酸的原位雜交和間接原位反轉(zhuǎn)錄PCR方法?! ?yīng)用建立的原位雜交檢測PRRSVSC-1株人工感染不同時(shí)間在仔豬體各組織器官的分布規(guī)律,結(jié)果表明
2、:感染后3d分別在扁桃體、淋巴結(jié)中檢測到PRRSV核酸RNA,感染后5d病毒RNA出現(xiàn)在肺臟、胸腺,感染后7d從腎、腦、腸、脾臟、肝臟中檢測到病毒。肺、腎臟、腦中病毒RNA含量較少;睪丸、附睪偶爾出現(xiàn)陽性信號;子宮、心臟、胰腺在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中均呈陰性反應(yīng)?! ?yīng)用原位雜交檢測各組織,結(jié)果表明,淋巴結(jié)陽性信號散在于整個(gè)淋巴小結(jié)。肺臟陽性信號主要分布于肺泡膈間質(zhì)的巨噬細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞。扁桃體陽性信號分布于其中的淋巴小結(jié)的生發(fā)中心以及間
3、質(zhì)巨噬細(xì)胞。胸腺中PRRS病毒多出現(xiàn)在髓質(zhì)部,皮質(zhì)中有少許細(xì)胞呈陽性反應(yīng)。在脾臟中陽性細(xì)胞為少許淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。肝臟陽性部位主要位于肝竇以及少量的肝細(xì)胞。腎臟陽性信號位于腎小球及其周圍。腸道陽性信號位于腸集合淋巴結(jié)及腸粘膜上皮細(xì)胞?! ?yīng)用間接原位RT-PCR檢測扁桃體、脾臟、肺門淋巴結(jié)、胸腺,人工感染后1d即可檢測出扁桃體陽性,感染后3d檢測出淋巴結(jié)、胸腺、脾臟陽性。 本研究對建立的原位雜交方法和間接原位RT-PCR方法檢測
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