基于PCR衍生技術(shù)和寡核苷酸芯片的SNPs檢測方法的探討.pdf

1、1.研究意義 該課題從PCR衍生技術(shù)和寡核苷酸芯片技術(shù)兩條途徑入手,旨在提出問題,發(fā)現(xiàn)問題,改進(jìn)技術(shù),完善技術(shù).2.研究方法 該研究一方面應(yīng)用基于PCR的衍生技術(shù)進(jìn)行SNPs檢測,以耐藥基因SHV中SNPs的檢測為靶標(biāo),對檢測方法的可行性、實(shí)驗(yàn)條件的最佳化和改良進(jìn)行探討,建立行之有效的檢測條件.3.研究成果 3.1基于PCR衍生技術(shù)的SNPs檢測技術(shù) 3.1.1 建立以耐藥基因SHV中SNPs的檢測的研究靶標(biāo),尤其構(gòu)建其兩個亞型的克隆,

2、為各種實(shí)驗(yàn)方法的評價提供已知模板,便于對檢測方法優(yōu)化和檢測結(jié)果的分析.3.1.2 提出在SSP-PCR的引物設(shè)計中,建議在特異性引物3'末端2~4位引入錯配堿基比不引入錯配能更好地提高對SNPs等位基因的分辨能力,使最佳退火溫度范圍加大,檢測條件更易于優(yōu)化.3.2 基于寡核苷酸芯片的SNPs檢測技術(shù) 3.2.1 建立了HLA-A、HLA-B多態(tài)性SNPs檢測的寡核苷酸芯片研究平臺,構(gòu)建HLA標(biāo)準(zhǔn)等位基因庫,便于對探針設(shè)計、樣品制備、雜交