內(nèi)毒素、組織胺作用下內(nèi)皮細(xì)胞通透性的變化及差異蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、完整的內(nèi)皮屏障對(duì)維持正常的血液循環(huán)和組織器官的正常功能具有十分重要的作用。內(nèi)皮細(xì)胞通透性升高是炎性反應(yīng)的重要特點(diǎn)，是微血管功能障礙的主要表現(xiàn)，也是引起組織缺氧和細(xì)胞代謝障礙的重要原因之一。內(nèi)皮細(xì)胞通透性改變的機(jī)制及其調(diào)控十分復(fù)雜，涉及眾多炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子、受體及信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)。本實(shí)驗(yàn)首先研究?jī)?nèi)毒素血癥時(shí)大鼠肺、腸組織微血管通透性的改變及內(nèi)毒素和組織胺對(duì)體外培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響并在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用雙向電泳、圖象分析和質(zhì)譜分析等蛋白

2、質(zhì)組學(xué)方法研究通透性相關(guān)的蛋白質(zhì)組改變，探討LPS和組織胺作用下體外培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞蛋白表達(dá)的差異性。主要結(jié)果及結(jié)論如下： 1.在大鼠內(nèi)毒素血癥模型上，5mg/kg和10mg/kgLPS均可造成肺、回腸組織伊文氏蘭含量增加，且以肺組織增加差異顯著，說(shuō)明肺組織微血管通透性明顯升高，同時(shí)可觀察到肺充血、出血。但5mg/kg與10mg/kgLPS對(duì)肺腸通透性的影響無(wú)明顯差異。 2.LPS(終濃度1μg，10μg，100μg/ml)

3、和組織胺(終濃度10-7，10-6，10-5mol/L)作用于體外培養(yǎng)的單層臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞4h，呈劑量依賴性地增加其對(duì)異硫氫酸熒光素標(biāo)記牛血清白蛋白(FITC-BSA)的透過(guò)率，其中以100μg/mlLPS和10-5mol/L組織胺的作用更為明顯。同時(shí)，用吖啶橙-溴化乙錠(AO-EB)雙染色和激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，結(jié)果LPS和組織胺均可引起內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，但以LPS作用更為明顯，這可能與其增加內(nèi)皮細(xì)胞通透性有一定關(guān)系。組織胺引

4、起內(nèi)皮細(xì)胞凋亡目前尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，其機(jī)制尚不清楚。 3.采用7cmIPG(pH3-10)進(jìn)行等電聚焦，上樣量200μg和考馬斯亮蘭G-250染色，獲得重復(fù)性較好的蛋白質(zhì)雙相電泳圖譜，組間匹配率為60-75％。篩選了9個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)并進(jìn)行基質(zhì)輔助的激光解吸離子飛行時(shí)間質(zhì)譜分析，其中7個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)獲得陽(yáng)性鑒定。結(jié)果顯示LPs作用4h后，Vimentin，γ-Actin，Hsp70/90-組織蛋白及硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶表達(dá)增加；而組織