腎缺血預處理對急性心肌梗死大鼠炎癥反應的影響及其機制.pdf

1、急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后常伴心肌組織壞死和炎性細胞浸潤，外周血白細胞發(fā)生不同程度改變，存在多種炎性因子的釋放。AMI作為一種炎癥損傷被廣泛認同，炎癥反應在AMI的發(fā)生發(fā)展中貫穿始終，炎癥細胞因子以炎細胞為介質(zhì)，在動態(tài)中不斷調(diào)整對AMI發(fā)展轉(zhuǎn)歸起作用，它們在AMI的早期免疫炎癥反應和后期心室重構(gòu)中發(fā)揮著重要作用。 缺血預處理(ischemic preconditioning，

2、IPC)是指預先反復短暫的缺血/再灌注，誘導機體產(chǎn)生內(nèi)源性保護機制，減輕臟器損傷。目前多數(shù)研究表明，心肌經(jīng)過缺血預處理后，炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8等會大量產(chǎn)生，但IL-10也隨之升高從而抑制促炎因子的活性，減少中性粒細胞滲出和氧自由基釋放進而保護心肌。1996年，Gho等發(fā)現(xiàn)小腸或腎臟短暫缺血，對隨后長時間的心肌缺血也有保護作用，進而提出遠距缺血預處理概念。經(jīng)腎缺血預處理后早期全身炎癥反應變化及其在心肌保護中的意義尚需進一步研究。

3、 目的：觀察腎缺血預處理后急性心肌梗死大鼠心肌梗死面積和早期炎癥反應變化，探究其在心肌保護中的作用機制。 方法： 1分組：將72只健康雄性成年Spraque-dawley(SD)大鼠隨機分為三大組，①對照組(NC,n=8)；②急性心肌梗死組(AMI，n=32)，結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支制做AMI模型；③腎缺血預處理組(RIP，n=32)，夾閉單側(cè)腎動脈5 min灌注5min，3個循環(huán)后復制AMI模型。各組大鼠分別在急

4、性心肌梗死后2h、4h、6h、12h四個時間點處死取材。 2觀測指標：①術(shù)中以MS-4000生物信號采集處理系統(tǒng)監(jiān)測并記錄大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖，確定心肌梗死模型成功；②心肌梗死面積測定：經(jīng)主動脈逆灌1％Even's藍，經(jīng)冷凍、切片后用2％TTC法染色，于手術(shù)顯微鏡下仔細分離梗死部位(IS)和缺血危險區(qū)(AAR)，并計算IS與AAR重量比值(IS/AAR)，推測心肌梗死面積；③HE染色觀察心肌病理變化，油鏡下計數(shù)浸潤白細胞數(shù)目；④用血細胞分析

5、儀計數(shù)外周血白細胞數(shù)目；⑤雙抗體夾心(ELISA)法測定血清白細胞介素8(IL-8)和白細胞介素10(IL-10)的含量；⑥采用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(RT-PCR)測定缺血區(qū)心肌組織IL-10mRNA和IL-8 mRNA表達情況。 結(jié)果： 1心梗模型制作成功：術(shù)后結(jié)扎線以下心肌顏色變暗，心電圖顯示術(shù)后20分鐘內(nèi)S-T段T波進行性抬高。 2.Even's藍TTC染色結(jié)果：RIP組12h IS/AAR(46.18±6

6、.15％)較AMI組(66.44±19.24％)明顯減小(P<0.05)。 3心肌組織病理形態(tài)學及白細胞浸潤結(jié)果：NC組心肌細胞結(jié)構(gòu)正常，細胞界限清晰，無或僅有少量中性粒細胞滲出；AMI組心肌水腫嚴重，細胞界限不清，心肌細胞出現(xiàn)顆粒變性、空泡變性，胞漿疏松透明，白細胞和紅細胞浸潤，2h、4h、6h和12h AMI組浸潤白細胞數(shù)目(LEU/HP)分別為：26.33±11.86、38.85±9.75、47.5±11.41和51.84

7、±6.12，其中4h、6h和12h較NC組(8.21±6.18)明顯增加(P<0.05)； RIP組心肌中度水腫，細胞界限基本清晰，炎性細胞散在浸潤，RIP組2h、4h、6h、12h浸潤白細胞數(shù)目分別為：28.2±16.08、45.0±16.76、48.31±6.12和40.1±5.38，4h、6h、12h較NC組增加明顯(P<0.05)；RIP組與AMI組比較2h、4h、6h浸潤白細胞數(shù)目無明顯差異(P>0.05)，僅在12h時減少(

8、P<0.05)。 4外周血白細胞計數(shù)結(jié)果：AMI組外周血白細胞計數(shù)2h、4h、6h和12h分別為4.6±1.44、6.58±1.57、7.2±2.41、12.86±3.91呈上升趨勢，其中4h、6h和12h較NC組(3.00±0.40)顯著增加(P<0.01)；RIP組2h、4h、6h和12h分別為6.84±2.04、7.92±2.59、8.22±3.9、和8.24±3.56，較NC組增加明顯(P<0.01)：RIP組與AMI組

9、僅在12h有明顯差異(P<0.05)。 5血清白介素水平：AMI組2h、4 h、6h和12h血清IL-8分別為9.09±3.39，10.4±3.47、11.5±3.19、和11.64±2.49，其中4 h、6h和12h較NC組(6.01±1.53)有明顯差異(P<0.05)；RIP組2h、4 h、6h和12h 血清IL-8分別為9.85±3.92、13.25±1.66、12.37±4.06、12.95±2.73，其中4 h、6h

10、和12h較NC組有明顯差異(P<0.05)，RIP組較AMI組血清IL-8濃度各時間點無明顯差異(P>0.05)。 AMI組2h、4h、6h、12h血清IL-10含量分別為68.70±11.07、78.78±8.06、80.59±12.62和79.19±11.28較NC組(63.67±17.39)增加無明顯差異(P>0.05)；RIP組2h、4h、6h、12h血清IL-10含量分別為121.68±33.91、183±16.29、

11、85.54±20.03、79.21±19.35，其中4 h較NC組增加明顯(P<0.05)；RIP組較AMI組僅見4 h升高差異明顯(P<0.05)。 6心肌組織白細胞介素基因表達：心肌IL-8 mRNA2h、4h、6h和12h相對表達量，AMI組分別為0.69±0.45、0.76±0.25、0.81±0.54和1.22±0.44，RIP組分別為0.52±0.09、0.56±0.17、0.37±0.21和0.45±0.29，其中

12、4h、6h和12hAMI組較NC組(0.25±0.71)有明顯差異(P＜0.05)，RIP組較NC組無明顯差異(P＞0.05)，RIP組較AMI缺血心肌IL-8 mRNA表達普遍降低，其中在6h和12h IL-8 mRNA明顯降低(P＜0.05)。 心肌IL-10 mRNA2h、4h、6h和12h相對表達量，AMI組分別為0.95±0.21、1.09±0.20和1.13±0.51、1.49±0.28，RIP組分別為0.81±0.

13、36、0.89±0.33、1.08±0.19和1.14±0.32，其中4 h、6h和12h AMI組較NC組(0.71±0.19)明顯增高(P<0.05)，RIP組較NC組6h、12h增高明顯(P＜0.05)，RIP組較AMI缺血心肌IL-10 mRNA表達普遍降低，但同時間點間無明顯差異(P＞0.05)。 結(jié)論： 1急性心肌缺血的心肌損傷早期伴白細胞浸潤增加，12h引起外周血中白細胞數(shù)量上升，全身炎癥反應增加。