樹突狀細(xì)胞對(duì)自體自然殺傷細(xì)胞體外擴(kuò)增及功能的影響.pdf

1、目的:探討樹突狀細(xì)胞(DCs)對(duì)自體自然殺傷(NK)細(xì)胞體外擴(kuò)增及殺傷活性的影響。 方法:通過在干細(xì)胞培養(yǎng)基(SCGM)和RPMI1640條件下分別以A：rhIL-2：B：rhIL-2、rhIL-15、SCF；C：rhIL-2、rhIL-15、SCF和CD3單抗三組因子擴(kuò)增正常人外周血來源的NK細(xì)胞，在NK細(xì)胞體外擴(kuò)增7天后，以A23187快速誘導(dǎo)自體DCs3天，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD1a、CD83高表達(dá)，然后分別以DCs與各組不

2、同細(xì)胞因子和培養(yǎng)基條件下的NK細(xì)胞以5∶1和1∶1的比例混合培養(yǎng)。在不同的培養(yǎng)時(shí)間觀察不同比例混合下及未與DCs混合各組NK細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)；通過流式細(xì)胞術(shù)分別于擴(kuò)增7、14、21天檢測(cè)NK細(xì)胞表面CD3-、CD56/16+的表達(dá)；在不同的時(shí)間以MTT法、以效靶比為10∶1檢測(cè)各組NK細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。用雙抗體夾心ELISA方法檢測(cè)DCs培養(yǎng)上清液、DCs與NK細(xì)胞不同比例混合各組培養(yǎng)上清液及NK細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和I

3、L-12p70的含量。 結(jié)果:以SCGM為培養(yǎng)條件，A、B、c三組因子組合下NK細(xì)胞體外擴(kuò)增倍數(shù)、CD3-、CD56-/CD16+表達(dá)率及對(duì)K562細(xì)胞殺傷效應(yīng)在體外培養(yǎng)14天時(shí)無明顯差別(P均＞O.05)。體外培養(yǎng)A、A5∶1、A1∶1三組14天時(shí)NK細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)分別為17.26±1.58、29.43±3.13和22.23±2.9l，A5∶1組擴(kuò)增倍數(shù)明顯高于其它兩組(P＜O.05)：A、A5∶1、A1∶1三組培養(yǎng)21天NK細(xì)

4、胞擴(kuò)增倍數(shù)分別為10.16±1.30、23.86±2.81和18.16±2.25，A5∶1組擴(kuò)增倍數(shù)高于其它兩組(P＜O.05)；同組間比較14天時(shí)擴(kuò)增倍數(shù)最高(P＜O.05)。A、A5∶1、A1∶1三組在體外培養(yǎng)14天時(shí)CD3-、CD56/16+表達(dá)率分別為(36.8±5.1)％、(60.4±8.1)％和(53.4±8.1)％，A5∶1組的表達(dá)率最高(P＜O.05)；A、A5∶1、A1∶1三組在體外培養(yǎng)21天時(shí)CD3-、CD56/16

5、+表達(dá)率分別為(29.6±5.7)％、(53.4±8.O)％和(45.3±7.9)％，仍以A5∶1組的表達(dá)率最高(P＜O.05)。A、A5∶1、A1∶三組在體外培養(yǎng)14天時(shí)對(duì)K562細(xì)胞的殺傷率分別為(68.5±3.4)％、(88.7±4.4)％和(82.4±6.3)％，A5∶1組殺傷活性也明顯高于其它兩組(P＜O.05)；在培養(yǎng)21天時(shí)A、A5∶1、A1∶1三組對(duì)K562細(xì)胞的殺傷率分別為(49.5±1.4)％、(72.4±5.3)％

6、和(68.5±3.4)％，A5∶1組殺傷活性也最高(P＜O.05)。在RPMI1640培養(yǎng)條件下，各組NK細(xì)胞的體外擴(kuò)增均小于7倍，明顯低于SCGM培養(yǎng)條件下各組NK細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)。DCs與NK細(xì)胞混合培養(yǎng)各組培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-12p70的含量均分別高于NK細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)組上清液和DCs培養(yǎng)上清液，且以5∶1比例混合培養(yǎng)的培養(yǎng)上清液中含量最高(P均＜O.05)。 結(jié)論:在SCGM培養(yǎng)條件，NK細(xì)胞能被有效擴(kuò)增。DCs和N