不同方式抗原負載的樹突狀細胞介導(dǎo)的細胞毒性T細胞體外腫瘤殺傷效應(yīng).pdf

1、免疫治療是繼手術(shù)治療、放療、化療之后腫瘤治療的新方法,其技術(shù)、方法日趨成熟,治療過程的安全性逐步提高.但是如何進一步提高治療效率、降低復(fù)發(fā)率及各種并發(fā)癥,提高患者生存質(zhì)量已成為腫瘤免疫治療領(lǐng)域的一項重要研究內(nèi)容.樹突狀細胞(DC)是目前已知的功能最強的抗原遞呈細胞(APC),它具有強大的T細胞激活能力,并能活化初始型T細胞.它不僅能夠激活自體的抗腫瘤免疫,同樣能夠提高異體的抗腫瘤效應(yīng),基于此,DC的抗腫瘤免疫治療已在臨床上開始應(yīng)用,顯示

2、出廣泛的前景.因為大部分病人和復(fù)發(fā)者的腫瘤組織和細胞的獲取較為困難,目前的方法難以廣泛有效地開展DC的免疫治療.而RNA可以在體外進行擴增,再利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染DC能較好地解決該問題,但是否會影響DC的誘導(dǎo)分化和功能,和其他方法相比,腫瘤殺傷效應(yīng)如何,需要進一步探討.該文實驗第一部分我們采用了外周血干細胞作為前體細胞,聯(lián)合應(yīng)用IL-4,GM-CSF和TNF-α誘導(dǎo)DC分化成熟,采取腫瘤細胞凍融抗原和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染腫瘤細胞總RNA兩種方式負載DC

3、,繼續(xù)培養(yǎng)至2周,光鏡和掃描電鏡觀察細胞形態(tài),流式細胞儀檢測DC表面標志,以此來鑒定培養(yǎng)的DC.第二部分實驗中,我們用尼龍毛柱法分離健康人外周血T細胞,與不同方式負載抗原的DC共培養(yǎng)后誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性的細胞毒性T淋巴細胞(CTL),流式細胞儀檢測CTL的CD3、CD4和CD8的陽性率,用乳酸脫氫酶(LDH)方法體外測定CTL殺傷腫瘤細胞的效率,比較凍融腫瘤抗原負載DC和轉(zhuǎn)染腫瘤細胞總RNA的DC所誘導(dǎo)出的CTL殺傷腫瘤的差異.通過該研究,