Genistein對人視網膜色素上皮細胞堿性成纖維生長因子表達的調控作用.pdf

1、視網膜血管新生是糖尿病性視網膜病、高血壓性視網膜病變以及視網膜中央靜脈阻塞綜合癥等多種疾病的主要病理改變，是導致患者失明的重要原因之一。眼內血管的形成以及與其相伴的滲出、出血及增生等一系列的病理改變可嚴重的破壞眼的結構和功能。盡管炎癥、創(chuàng)傷、腫瘤等很多情況下均可伴發(fā)新生血管，但與眼內新生血管關系最為密切的病因仍是缺血、缺氧。 Genistein(Gen)是從大豆蛋白中提取的主要活性物質，作為經典的酪氨酸激酶抑制劑具有廣泛的作用，

2、其不僅對乳腺癌、前列腺癌有很強的化學預防作用，而且對心血管疾病和其他一些慢性病都有明顯的治療作用。Gen在動物實驗中可以抑制由bFGF(basicfibroblastgrowthfactor)誘導的脈絡膜和角膜血管新生，我們以往的研究也發(fā)現(xiàn)，Gen可以顯著抑制相對缺氧誘導C57小鼠視網膜血管新生，以及Gen可以顯著抑制缺氧誘導的RPE(retinalpigmentepitheliumcells)細胞的VEGF(vascularendot

3、helialgrowthfactor)和HIF-1(hypoxiainduciblefactor-1)的表達。雖然VEGF在常氧和缺氧條件下都是一種高效的促進視網膜血管新生的因子，但有報導說在相同的劑量下bFGF有比VEGF更強的促進眼部血管新生的作用。盡管如此Gen抑制眼內血管新生的分子機制尚未完全明確。 視網膜色素上皮細胞(retinalpigmentepithelium，RPE)位于視網膜的最外層，具有對視網膜外層傳遞來自

4、脈絡膜的營養(yǎng)，和對光感受器外節(jié)脫落的膜盤以及代謝產物進行吞噬作用，起著視網膜-脈絡膜屏障作用。許多研究已經表明RPE細胞能夠分泌多種細胞因子和生長因子，在一些血管新生性眼病的病理過程起著重要的作用，其中HIF-1,VEGF和bFGF在視網膜血管新生性疾病的病理過程中可能起著非常重要的作用。 本實驗室的前期工作已經證明Gen具有很強的抑制視網膜血管新生的作用，同時發(fā)現(xiàn)Gen能夠顯著抑制缺氧誘導RPE的HIF-1和VEGF的表達，為

5、進一步在細胞水平上研究Gen抑制視網膜血管新生的可能機制，我們繼續(xù)研究缺氧(95﹪N2、5﹪CO2)等條件下bFGF的表達以及Gen對此表達的影響。采用RT-PCR和westernblot方法，半定量測定人RPE細胞在缺氧處理后bFGFmRNA和蛋白的表達，以及Gen對其的影響。結果提示缺氧處理可明顯增加人RPE細胞bFGFmRNA的表達，Gen處理24h后，bFGFmRNA的水平可達正常對照組的2倍以上。如細胞缺氧實驗前經Gen(10

6、，20，50，100，200μmol/L組)預處理30min，細胞內bFGFmRNA的水平可呈濃度依賴性的下降。200μMGen作用下bFGFmRNA的水平降至對照的30.4﹪。Westernblot實驗中，我們發(fā)現(xiàn)缺氧條件下bFGF蛋白表達也明顯增高，可達正常對照組的2倍以上。Gen(10，20，50，100，200μmol/L組)預處理同樣呈濃度依賴性的抑制了缺氧誘導的bFGF蛋白的表達。其中Gen200μM組作用最為顯著，bFGF