轉(zhuǎn)化生長因子-β1和過氧化氫酶在肝纖維化血管生成中的作用機(jī)制研究.pdf

1、背景及目的:
　　氧化應(yīng)激、肝星狀細(xì)胞(HSC)、細(xì)胞因子以及血管生成都是肝纖維化形成的重要機(jī)制。過氧化氫酶(Catalase)是一種內(nèi)源性抗氧化酶，具有改善肝纖維化的效果。轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)是一種促纖維化因子，亦可介導(dǎo)肝纖維化過程中的血管生成。本實(shí)驗(yàn)中我們將觀察Catalase對(duì)TGF-β1介導(dǎo)的肝纖維化血管生成的影響。
　　方法:
　　1.建立動(dòng)物模型:采用40％CCl4皮下注射方法建立肝纖維化模型。

2、動(dòng)物分為正常對(duì)照組和肝纖維化模型組。8周后做HE和Massson染色觀察大鼠肝臟病理情況。WB檢測大鼠肝臟第1、4、6、7、8周Catalase表達(dá)情況，免疫組化、WB及real-timePCR檢測兩組動(dòng)物肝臟中TGF-β1、α-SMA、VEGF、CD31、Ang-1和Tie-2的表達(dá)差異。
　　2.構(gòu)建Ad-Catalase、Adsh-Catalase、Ad-TGF-β1和Adsh-TGF-β1腺病毒載體，熒光顯微鏡和WB檢測病

3、毒感染效率。
　　3.WB檢測Ad-Catalase感染的HSC-T6細(xì)胞中α-SMA表達(dá)。
　　4.MTT法檢測Ad-Catalase及Adsh-Catalase+Adsh-TGF-β1聯(lián)合感染組HSC-T6細(xì)胞的增殖能力。Transwell法檢測Ad-Catalase及Adsh-Catalase+Adsh-TGF-β1聯(lián)合感染組HSC-T6細(xì)胞的遷移能力。ELISA法檢測Ad-Catalase及Adsh-Catalase

4、+Adsh-TGF-β1聯(lián)合感染組HSC-T6細(xì)胞Ⅰ型膠原和Ang-1的分泌情況。
　　5.WB和real-timePCR檢測腺病毒感染的HSC中Catalase、TGF-β1、VEGF、CD31、Ang-1和Tie-2的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.CCl4模型組大鼠肝臟病理損害嚴(yán)重，肝細(xì)胞明顯腫脹、變性，以脂肪變性為甚，部分肝細(xì)胞出現(xiàn)氣球樣變性，肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞，肝小葉周圍壞死明顯，纖維組織增生并伴有假小葉形成。

5、在CCl4模型大鼠的肝臟中α-SMA、TGF-β1、VEGF、CD31、Ang-1、Tie-2表達(dá)增強(qiáng);Catalase表達(dá)的減少。
　　2.Catalase過表達(dá)可明顯下調(diào)HSCs中α-SMA表達(dá)，抑制HSCs增殖及遷移，減少Ⅰ型膠原及Ang-1分泌。
　　3.TGF-β1過表達(dá)可顯著下調(diào)Catalase的表達(dá)量并影響Catalase酶活性;抑制TGF-β1表達(dá)則可以明顯上調(diào)Catalase的表達(dá)量及Catalase酶活性

6、，若同時(shí)下調(diào)Catalase表達(dá)則可部分拮抗TGF-β1所致的上調(diào)作用，該作用在轉(zhuǎn)錄水平最為明顯。
　　4.下調(diào)TGF-β1可明顯抑制CD31、VEGF、Ang-1、Tie-2等促血管生成因子的表達(dá)，抑制HSC的增殖效率及遷移能力，有效減少HSC中Ⅰ型膠原以及Ang-1的分泌;而同時(shí)下調(diào)Catalase表達(dá)則可部分抵消這種抑制作用。
　　結(jié)論:
　　細(xì)胞因子、HScs、氧化應(yīng)激、血管生成都參與了肝纖維化的形成。Cata