肥厚型心肌病患者中Fabry病發(fā)病狀況的臨床研究.pdf

1、目的:1.利用酶學(xué)技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)在既往被診斷為肥厚型心肌病(HCM)的患者中篩選Anderson-Fabry病患者,從而分析該病被誤診為肥厚型心肌病的情況；2.分析漢族人群中該病的臨床特點；3.篩選該病的突變位點；4建立一種酶學(xué)檢測與基因檢測相結(jié)合對Andcrson-Fabry患者進行臨床前期診斷的方法。
　　 方法:1.臨床收集的427例既往被診斷為肥厚型心肌病的患者(均為山東大學(xué)齊魯醫(yī)院門診及住院患者),在知情同意的的

2、前提下抽取外周靜脈血約2mL,離心,吸取上層血清后,應(yīng)用底物法測定α-半乳糖苷酶A的活性。HCM患者的酶活性以與同性別對照組平均酶活性比值表示。對酶活性為0％-30％的男性和0％-50％的女性HCM患者進行基因?qū)W分析,提取白細胞,利用酚一氯仿法抽提基因組DNA,另選100名健康志愿者作為正常對照；2.聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction,PCR)擴增GLA基因相應(yīng)的七個外顯子,對擴增產(chǎn)物進行1.5％瓊脂糖凝膠電泳

3、以了解擴增的效率及特異性；3.利用單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(Singlestrandconformationpolymorphism,SSCP)分析PCR擴增產(chǎn)物,處理后的產(chǎn)物行8％及10％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,銀染法顯色觀察結(jié)果；4.根據(jù)同一塊膠上電泳條帶遷移率的差異判斷是否有陽性結(jié)果,出現(xiàn)異常條帶者擴增其全部外顯子及相鄰的部分內(nèi)含子序列,應(yīng)用低熔點膠回收后送公司測序；5.對基因突變陽性者進行家系調(diào)查。
　　 結(jié)果:1.我們成功

4、地對427例肥厚型心肌病患者及100例正常對照者的α-半乳糖苷酶A活性進行了檢測。其中,男性患者中,共有5人的酶活性小于30％；女性患者中,共有8人的酶活性小于50％。2.對上述13人的GLA基因的七對外顯子進行了PCR擴增；3.全部擴增產(chǎn)物均經(jīng)過兩種條件下的單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSCP)進行基因突變的篩選,通過反應(yīng)條件的調(diào)整,每一個PCR產(chǎn)物均形成清晰的單鏈條帶,與正常人相應(yīng)的單鏈帶進行了比較分析；4.對427例心肌肥厚患者進行α-半

5、乳糖苷酶A活性測定后發(fā)現(xiàn),男女間的酶活性無明顯差異。男性患者中,共有5人的酶活性小于30％；女性患者中,共有8人的酶活性小于50％。對上述13人進行了基因?qū)W分析后發(fā)現(xiàn),5例患者攜帶有GLA基因突變,而另外的4例患者攜帶有GLA基因的多態(tài)突變。致病突變?yōu)?A143T、E358del、S238N、G1168A和G1170。經(jīng)酶活性檢測和基因?qū)W分析后,共有5例患者被確診為Fabry病。其中攜帶G1168A突變的女性患者家庭成員中另有3例Fab

6、ry病基因突變攜帶者,分別為患者的母親和姐姐,但均無明顯的臨床癥狀。5.對Fabry病患者的臨床資料進行分析發(fā)現(xiàn),該病患者的腎臟疾病發(fā)病率和腎臟疾病家族史明顯高于其他左室肥厚患者(P<0.05),而心室壁厚度、傳導(dǎo)系統(tǒng)異常和家族心肌病史無明顯差異(P>0.05)(表4)。
　　 結(jié)論:1.山東漢族人群肥厚型心肌病的患者中,Fabry病的發(fā)病率為1.2％.2.Fabry病患者的腎臟疾病發(fā)病率和腎臟疾病家族史明顯高于其他左室肥厚患者